La Resistencia a fluconazol en Cryptococcus neoformans no estaría relacionada con mutaciones en el gen MSH2 perteneciente a la vía de reparación de ADN

MAIDANA-JACOB, M; THEILL L; GUELFAND, L; FROLA C; GARCIA, G.; GAMARRA, S.

TUCUMAN

Congreso; XIX Congreso Argentino de la Sociedad Argentina de Infectología. 2019.; 2019

SADI

Título: La Resistencia a fluconazol en Cryptococcus neoformans no estaría relacionada con mutaciones en el gen MSH2 perteneciente a la vía de reparación de ADN.Maidana-Jacob M1, Theill L1, Guelfand L, Frola C, Garcia-Effron G1,3*, Gamarra S.1 Laboratorio de Micología y Diagnóstico Molecular - Cátedra de Parasitología y Micología ? Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas ? Universidad Nacional del Litoral. Santa Fe (Argentina).2 Hospital J. A. Fernández, Buenos Aires, Argentina.3 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICET). CCT-Santa Fe (Argentina).IntroducciónEl tratamiento habitual de las infecciones causadas por Cryptococcus neoformans incluye al fluconazol. Se han descrito varios mecanismos de resistencia a este azol que incluyen mutaciones puntuales en los genes ERG11 (diana de azoles), hiperexpresión de bombas de eflujo causadas por mutaciones en genes reguladores en trans (gain of function) y un fenómeno de resistencia reversible causado por aneuploidías de los cromosomas 1 y 4 denominado heterorresistencia. La selección de mutantes fúngicos resistentes durante el tratamiento antifúngico puede ser mayor en cepas que tienen defectos en los mecanismos de reparación del DNA que se activan durante la replicación o por mutágenos exógenos. La reparación de DNA en células eucariotas se da por dos vías llamadas ?mismatch repair? (MMR) y ?double-strand break repair? (DSBR). Actualmente, existe un importante debate científico sobre si las mutaciones en el gen MSH2 de la vía MMR son o no responsables de una mayor tasa de mutaciones que generan resistencia a las equinocandinas y a los azoles en patógenos fúngicos. Objetivos: Analizar las secuencias de los genes MSH2 de cepas clonales de Cryptococcus neoformans aisladas de pacientes en tratamiento con fluconazol consideradas resistentes a este azol con y sin mutaciones en ERG11.Material y métodos: Se estudiaron 6 pares de cepas clonales de Cryptococcus neoformans (antes var. grubii). Estos pares incluían un aislamiento inicial y uno intratratamiento. Se incluyó como control la cepa C. neoformans H99. Se identificaron molecularmente por secuenciación de ITS y la diferenciación intravarietal se estableció por diferencias en la secuencias del gen STR1. Se los clasificó como clonales utilizando el esquema de MLST de ISHAM. Se evaluó la sensibilidad a los antifúngicos siguiendo los documentos M27-4ed y M60 de CLSI. Los genes ERG11 (regiones 5´, 3´ y ORF) se amplificaron y secuenciaron. Resultados: Todos los aislamientos iniciales presentaron CIMs ≤ 0.5 ug/ml a fluconazol. Las 6 cepas aisladas intratratamiento presentaron CIMs ≥ 8.0 ug/ml. De estas últimas, 3 presentaron mutaciones en ERG11 asociadas a resistencia a fluconazol (Y145F, P253L y G484S). Ninguna de las 12 cepas presentaron mutaciones en el gen MSH2 independientemente si se trataba de cepas resistentes o no a fluconazol o si presentaban o no mutaciones en el gen ERG11. Par clonalCIM FLC(µg/ml)ERG11MSH2AInicial0.12WTWT11 meses con FLC8.00P253P/LWTBInicial0.25WTWT8 meses con FLC32.00G484SWTCInicial0.25WTWT10 meses con FLC64.00Y145FWTDInicial0.12WTWT14 meses con FLC8.00WTWTEInicial0.25WTWT9 meses con FLC8.00WTWTFInicial0.50WTWT12 meses con FLC8.00WTWTConclusiones: Los resultados obtenidos indican que los fenotipos de resistencia a fluconazol, ligados o no a mutaciones en ERG11, son independientes del gen MSH2. Sin embargo, habría que aumentar el número de cepas estudiadas para que esta afirmación pueda confirmase ya que por ejemplo, solo el 55% de las Candida glabrata resistentes a antifúngicos presentan mutaciones en MSH2.