Diagnóstico de Neosporosis en perros: evaluación de una prueba de ELISA indirecta in-house.

ÁLVAREZ, B.; CAMPERO, L.M.; DE FELICE, L.; UNZAGA, J.M.; VENTURINI, M.C.

Rio Cuarto

Congreso; XXII Reunión Científico Técnica, Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico (AAVLD).; 2018

AAVLD

Neospora caninum es un parásito de vida intracelular del Phylum Apicomplexa que afecta a los caninos con la manifestación de signos neurológicos y musculares. Es importante contar con pruebas diagnósticas eficientes, que permitan contribuir al manejo y control de la enfermedad.Objetivo: Evaluar una prueba de ELISA indirecta in-house elaborada con proteínas solubles de la cepa de referencia NC-1Materiales y métodos Se analizaron 103 sueros caninos con las pruebas de Inmunofluorescencia indirecta (IFI) e Immunoblot (IB).Formación del estándar relativo de comparación (ERC): Sueros positivos y negativos a ambas pruebasLa prueba de ELISA indirecta se realizó en placas de 96 pocillos sensibilizadas con 0,5 µg de proteínas solubles totales de N. caninum de la cepa de referencia NC-1. Los sueros fueron analizados por duplicado a una dilución de 1:100 (Figura 3). Se realizó la lectura a 492nm. El valor del índice de cada muestra se realizó según el cálculo de cada una de las densidades ópticas obtenidas del duplicado de cada muestra: VMn= (DOn-N)/(P-N). Donde: VMn es el valor de la muestra para la densidad óptica n; DOn es el valor de DO de un duplicado de la muestra; N es el promedio de DO del control negativo; P es el promedio de DO del control positivo. Luego se calculó el promedio de las dos VMn obtenidas para cada muestra, resultando en el valor del índice final de la muestra.Análisis estadísticoSe determinaron las características diagnósticas de la prueba de ELISA y se calculó el punto de corte más óptimo donde se alcanzaran los máximos valores de Sensibilidad (Se) y Especificidad (Sp) relativa utilizando un intervalo de confianza del 95% mediante el análisis ROC. El área bajo la curva ROC (AUC) se evaluó como: no informativa (AUC= 0,5), poco precisa (0,5 < AUC ≤ 0,7), moderadamente precisa (0,7 < AUC ≤ 0,9), altamente precisa (0,9 < AUC≤1) y prueba perfecta (AUC= 1). Adicionalmente, se calculó la concordancia entre el ERC y la prueba de ELISA mediante el índice kappa (k) (Epidat 3.1) considerando el grado de acuerdo como: pobre (k= 0,00), débil (k= 0,00?0,20), aceptable (k= 0,21?0,40), moderada (k= 0,41?0,60); muy buena (k= 0,61?0,80) y excelente (k ≥ 0,81).ResultadosDel total de sueros analizados el ERC quedó compuesto por 101 sueros con resultados concordantes a las pruebas de IFI e IB. Los valores de Se y Sp relativas al ERC para la prueba de ELISA fue de 86% y 73%, respectivamente, utilizando un punto de corte de 0,52 (índice). El área bajo la curva fue moderadamente precisa con un valor AUC= 0,84 (0,76 a 0,91) en relación al ERC (Figura 4). La concordancia entre el ERC y la prueba de ELISA evaluada resultó moderada con un valor kappa= 0,46 (Tabla 1).Conclusión y discusiónSe evaluó una prueba de ELISA con proteínas solubles totales para la detección de anticuerpos anti-N. caninum en perros. Para ello se conformó un panel de sueros del ERC previamente clasificados como positivos y negativos por las pruebas de IFI e IB. El valor de Sp de la prueba evaluada demuestra la detección de falsos positivos. Los 21 sueros positivos a la prueba de ELISA y negativos por IFI e IB (ERC), resultaron positivos a Toxoplasma gondii por IFI, lo que podría demostrar la presencia de resultados falsos positivos debido a reacciones cruzadas con dicho protozoo. El uso de un antígeno específico podría optimizar los valores diagnósticos de la prueba. El antígeno NcSRS2 (p38) de N. caninum ha sido utilizado como antígeno diagnóstico en múltiples pruebas de ELISA en varias especies animales. De este modo, sería interesante evaluar en nuestro medio la prueba de ELISA con dicho antígeno para el diagnóstico de neosporosis en perros con el fin de obtener una mejor performance diagnóstica.