Uso de la Terapia Fotodinámica mediada por dendrímeros del ácido 5-aminolevulínico en un modelo in vitro de una lesión aterosclerótica.

GUSTAVO CALVO, MARIELA A. CÉSPEDES, DANIEL SÁENZ, TAMARA JEREZ PELLEGRINO, PABLO VALLECORSA, ALCIRA BATLLE, ADRIANA CASAS, GABRIELA DI VENOSA.

Encuentro; IV Reunión del grupo Argentino de Fotobiólogos Moleculares (GRAFOB); 2018

La Terapia Fotodinámica (TFD) es un tratamiento en el cual se combina un fotosensibilizante (Fs) y luz de longitud de onda adecuada dentro de la célula blanco. Esta combinación da lugar a la generación de especies reactivas de oxígeno y radicales libres, que provocan la muerte celular. La fotosensibilización puede ser mediada por porfirinas endógenas, sintetizadas a partir del precursor ácido 5-aminolevulínico (ALA). Típicamente se utiliza en el tratamiento antitumoral y de microorganismos, pero también está planteado su uso para el tratamiento de lesiones ateroscleróticas. Para mejorar la entrada de ALA en las células, se ha utilizado la estrategia de sintetizar derivados que aumentan su lipofilicidad, ya que el ALA es hidrofílico. Un ejemplo son los dendrímeros que contienen varias moléculas de ALA. Una desventaja de su uso en TFD ha sido la captación por el sistema reticuloendotelial, ya que este secuestra moléculas de pro-Fs que deberían llegar hasta el tumor; sin embargo, esto constituye una ventaja para el tratamiento de placas de ateroma, ya que permite la incorporación selectiva de dendrímeros por los macrófagos que forman parte de esta.El objetivo del trabajo ha sido estudiar tanto la captación de los compuestos, como la respuesta a la TFD, empleando 2 dendrímeros conteniendo 6 o 9 moléculas de ALA (6m-ALA y 9m-ALA), y usando como modelo dos líneas celulares: células endoteliales Hmec-1, y células macrofágicas Raw264.7.Se evaluó la síntesis de porfirinas a partir de los dendrímeros, por extracción química y cuantificación de fluorescencia. Los resultados mostraron una mayor síntesis de porfirinas en los macrófagos (6m-ALA= 52 ± 6 UF, 9m-ALA= 59 ± 7 UF) que en las células de endotelio (6m-ALA= 28 ± 3 UF, 9m-ALA= 27 ± 2 UF)La respuesta a la terapia se evaluó midiendo la viabilidad de las células, y cualitativamente por microscopia. La LD50 se calculó como la dosis de luz (Joules/cm2) necesaria para matar el 50% de las células. Los resultados mostraron una mayor sensibilidad a la TFD por parte de la línea Raw264.7 (LD50=11,7 mJ/cm2), comparada con las Hmec-1 (LD50=44,6 mJ/cm2), lo que fue consistente con una mayor síntesis de porfirinas. En el análisis cualitativo del co-cultivo, se vio por microscopía de fluorescencia, una mayor síntesis de porfirinas y una mayor respuesta a la terapia en las células Raw 264.7 que en las Hmec-1.El estudio por citometría de flujo usando el kit anexina/ioduro de propidio, mostró que luego de la TFD utilizando dendrímeros, los macrófagos mueren por apoptosis, mientras que las células endoteliales no son dañadas.Como conclusión, podemos decir que los dendrímeros de ALA son una alternativa promisoria para el tratamiento de placas ateromatosas, ya que muestran in vitro tener selectividad por las células macrofágicas, que in vivo están formando parte del tejido aterosclerótico.