Participación de las especies reactivas del oxígeno y el estado redox en la activación de ovocitos bovinos in vitro

SERGIO MORADO; PABLO CETICA; MARTHA BECONI; JEREMY THOMPSON; GABRIEL DALVIT

Buenos Aires

Jornada; III Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; 2012

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

La participación las especies reactivas del oxígeno (ROS) y su asociación con el estado de óxido-reducción (redox) en la activación de los ovocitos es aún controversial. El objetivo del presente trabajo fue determinar la producción de ROS y el estado redox durante el desarrollo temprano in vitro de ovocitos bovinos activados por espermatozoides o partenogenéticamente. Los complejos ovocito-cumulus (COCs) obtenidos por aspiración de folículos antrales de ovarios de vacas de faena fueron cultivados en medio 199 durante 22 hs en estufa de aire humidificado. La fecundación in vitro se llevó a cabo con semen congelado en pajuelas, descongelado en IVF-mSOF con una concentración final de 2x10 6 espermatozoides móviles/ml. Los ovocitos activados partenogenéticamente fueron previamente denudados y luego incubados 5 min en medio TALP + BSA + ionomicina, 3 hs en mSOF + 6-dimetilaminopurina + citochalacina B y finalmente 21 hs en mSOF + BSA. Ovocitos sin activar fueron utilizados como controles. Los niveles de ROS y el estado redox fueron determinados a partir de la activación, mediante 2´,7´-diclorodihidrodiacetato de fluoresceína y Redox Sensor Red CC-1 respectivamente. El estadio nuclear se determinó por Hoechst. Se observó una diferencia significativa entre los niveles de ROS y el estado redox entre los ovocitos no activados y los activados por ambos métodos (p