Control Hormonal de las corrientes de la fase 1 del potencial de acción cardiaco en el Síndrome de Brugada

ARGENZIANO MARIANA; TISCORNIA GISELA; MORETTA ROSALIA; AMORENA CARLOS; GARCIA GRAS EDUARDO

Ciudad Autonoma de Buenos Aires

Congreso; XXXIX Congreso Argentino de Cardiología de la Sociedad Argentina de Cardiología; 2013

Sociedad Argentina de Cardiologia

ObjetivoEl Síndrome de Brugada (SB) es una canalopatía que se caracteriza por un potencial de acción cardíaco irregular asociado con eventos arrítmicos y muerte súbita sin anomalía estructural aparente (Frustaci A. y col. 2005, Brugada P. y col. 1992). Su fenotipo clínico es más predominante en hombres que en mujeres y suele presentarse en adultos con una edad media de 41 años (Antzelevich C. y col. 1999). De acuerdo al modelo prevalente del SB, la inestabilidad que conduce a la generación de arritmias se basa en un incremento de la corriente de potasio Ito en el epicardio. El canal Kv4.3 es el principal responsable por esta corriente en los cardiomiocitos. En este mecanismo la acentuación del ?notch? del potencial de acción en epicardio conduce a la pérdida eventual del ?plateau? de calcio, (origen de la elevación del segmento ST en el electrocardiograma), reentrada en fase 2 y consecuentemente taquicardia/fibrilación ventricular (VT/VF) (Di Diego JM. Y col. 2002). Se ha reportado (Matsuo y col. 2003) que los pacientes con SB tienen niveles más altos de testosterona que la media poblacional, lo que sugiere un rol de los andrógenos en el desarrollo del SB. Por lo tanto, nos propusimos investigar si la Testosterona controla la expresión del canal de potasio Kv4.3, como así también de otros canales involucrados en las fases 1 y 2 del potencial de acción cardíaco.Materiales y MetodosCelulas HL-1: Linea celular de miocitos cardiacos de ratón. Ratas: Wistar machos de 3 meses de edad. Las ratas fueron tratadas con Vehículo (C), Finasteride (F) (2mg/día), Flutamida (U) (10mg/día) y Testosterona (T) (5mg/día) durante una semana.Modelo Experimental de Síndrome de Brugada: Nuestro modelo es una adaptación del presentado por Di Diego y colaboradores ((Di Diego JM. Y col. 2002). Usamos ventrículos derechos de rata perfundidos con Tyrode´s solution con 5 M Terfenadina y 5 M Pinacidil y estimulados con un pulso cuadrado de 30mseg a una frecuencia de 5Hz.Protocolo de estimulación arritmogénico (descripto por Di Diego y Col. (2002)): 10 Hz por 10 segundos, 20 Hz por 10 segundos y 1 minuto a 0.5 Hz (cuando se hicieron las mediciones).RT-qPCR: ARN aislado con Trizol (INVITROGEN). Trascripción reversa con Random Primers (Biodynamics) y RevertAid M-MuLV Reverse Transcriptase (Fermentas). Para la Real Time PCR se uso Fast Start Universal SYBR Green Master Rox (Roche)Western blot: anti-Kv4.3 (Alomone Labs, Israel), anti-NCX (Santa Cruz Biotechnology, USA), anti- tubulin (control de carga, Santa Cruz Biotechnology, USA) y anti-rabbit IgG anticuerpo secundario conjugado a fosfatasa alcalina (Santa Cruz Biotechnology, USA).ResultadosInicialmente analizamos el control androgénico de los canales de fase 1 y 2 en celulas HL-1 (miocitos cardiacos de ratón) mediante RT-qPCR. Estos experimentos concluyeron que las expresión de Kv4.3 así como la del intercambiador sodio calcio (NCX) son inducidas por andrógenos, mientras que otros canales permanecen inalterados. Luego analizamos la regulación de la expresión de estos canales iónicos en ratas de los grupos Control, Finasteride , Flutamida y Testosterona. Los ensayos de RT-qPCR y Western Blot demostraron que Finasteride y Flutamida logran disminuir los niveles de expresión del canal Kv4.3 en 25% y 40% respectivamente, mientras que la Testosterona aumenta la expresión de NCX en un 50% y la Flutamida lo reduce un 80%. Finalmente evaluamos los efectos de las hormonas androgénicas en un modelo experimental del SB. Evaluamos las respuestas de los corazones de los distintos grupos a un protocolo de estimulación arritmogénico en nuestro modelo experimental del SB y se compararon los parámetros del potencial de acción ante los distintos tratamientos. Se observó que en el grupo Testosterona el APD30 (5,74±0,55 vs. 7,99±0,66) y el tiempo al pico (2,64±0,55 vs. 4,90±0,39) disminuyen respecto del control. Sugiriendo que los potenciales de acción del grupo Testosterona son más cortos permitiendo que ocurra el fenómeno de reentrada. En cuanto a la frecuencia de extrasistoles inducidas por el protocolo de estimulación arritmogenico, también se observo una variación significativa con la actividad androgénica. El grupo T presenta una frecuencia mayor presentando 100% de casos positivos de extrasístoles, mientras que estos solo llegaron al 20% en el grupo tratado con Finasteride. ConclusionEstos resultados sugieren que la testosterona posee un efecto regulatorio sobre los canales iónicos involucrados en el potencial de acción cardíaco, actuando no sólo sobre la generación del mismo sino también sobre su terminación. Estos efectos sumados derivan en el acortamiento del potencial de acción pudiendo provocar el fenómeno conocido como reentrada en fase 2 descripto en SB como el desencadenante de la VT/VF que conlleva a la muerte súbita cardíaca en adultos jóvenes. Los resultados sugieren la posibilidad de usar al Finasteride como tratamiento farmacológico para el Síndrome de Brugada.