DETERMINACION ULTRASENSIBLE DE GLIADINA MEDIANTE INMUNOENSAYOS UTILIZANDO NANOPARTICULAS DE PLATA: EFECTO DEL TAMAÑO DE LAS NANOPARTICULAS EN LA SENSIBILIDAD DE LA TECNICA.

MERCADAL, PABLO; FRAIRE, JUAN C.; MOTRICH, RUBEN D.; CORONADO, EDUARDO A.

Villa Carlos Paz

Congreso; XX Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2017

El gluten es un complejo proteico compuesto de gliadina y glutenina, que está contenido en los granos de cereales como trigo, cebada, centeno, avena y sus especies híbridas. Por su parte, la gliadina es la responsable de provocar la celiaquía, una enfermedad autoinmune que produce intolerancia al gluten. Actualmente, el contenido de gliadina en un alimento se determina por métodos del tipo ELISA1. En este trabajo se desarrollo un nuevo método que presenta ventajas considerables con respecto a ELISA en cuanto al límite de detección, numero de pasos, cantidad de reactivos y costo. El principio de esta novedosa técnica se basa en combinar el cambio que experimenta la respuesta óptica de una dispersión coloidal de nanoesferas de plata (Ag NSs) funcionalizadas con estreptavidina y biotina (STV-biotina) en una relación molar (1:1:1) con la capacidad de reconocimiento biomolecular del anticuerpo especifico para gliadina. En una primera etapa se induce la aglomeración controlada de las Ag NSs (formación de dímeros de Ag NSs) en presencia de diferentes concentraciones de inmunoglubulina G Biotiniliada (Biot-IgG) que actúa como puente molecular entre las Ag NSs previamente funcionalizadas con (STV-biotina). La formación de estas estructuras diméricas se evidencia experimentalmente por una disminución en la intensidad de extinción (absorción + dispersión). Una vez determinada la concentración óptima de Biot-IgG para favorecer la mayor formación de dímeros, en una segunda etapa, se efectúa el mismo experimento en presencia de un antígeno el cual inhibe la formación de estructuras diméricas y produce una variación en la intensidad de extinción en función de la concentración de antígeno2. Este hecho permite obtener una curva de calibración y cuantificar específicamente el analito (gliadina) hasta concentraciones de 0.34 pg/mL. A su vez, se emplearon Ag NSs de 60 y 78 nm de diámetro para evaluar el efecto del tamaño de las mismas, encontrándose que un aumento del tamaño de las nanoparticulas incrementa la sensibilidad de la técnica. Además, la validez de esta técnica, denominada IDILA (Intensity depletion inmunolinked assay) fue comparada con ensayos ELISA en muestras reales de alimentos. También destacamos que la cuantificación y detección puede realizarse utilizando los mismos equipos que se requieren para la técnica ELISA, su implementación en laboratorios convencionales es directa y no requiere equipamiento adicional sofisticado.Referencias 1.Garcıa. E, et al., European Journal of Gastroenterology & Hepatology 2005, Vol 17 No5. 2. Juan C. Fraire, et al., Nanoscale, 2016, 8, 17169-17180