Adaptación del uso de marcadores moleculares para evaluar recursos forestales nativos

BARRANDEGUY, M.E.; C.F. ARGÜELLES; M.V. GARCÍA

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Forestal Mundial; 2009

            Anadenanthera colubrina var cebil (curupay), es un recurso forestal nativo de Misiones (Argentina). Su alta tasa de regeneración y rápido crecimiento la convierten en una especie con alto potencial para el manejo forestal sustentable (Justiniano y Fredericksen, 1998). Además, su madera presenta valor económico por su dureza y su alto poder calorífico (Ulibarri, 2002). El objetivo de este trabajo es adaptar el uso de marcadores moleculares para cuantificar la diversidad genética en poblaciones naturales, y ponerla de relieve para su potencial empleo en programas de conservación, mejoramiento y reforestación. Los microsatélites (SSRs) constituyen un marcador molecular basado en la amplificación del ADN a partir de secuencias que flanquean regiones repetitivas (Tautz, 1989). Debido a su hipervariabilidad, codominancia, y reproducibilidad, los SSRs son altamente informativos y proveen un medio eficiente para detectar variación genética (Mahammad et al., 2000; Powel et al, 1996). Su utilidad se ve limitada por el requerimiento de información de secuencias de ADN para el diseño de cebadores que faciliten la amplificación mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (Provan et al., 2004). Así, la caracterización de microsatélites de novo es técnicamente demandante y costosa (Kaundun y Matsumoto, 2002) y ha quedado relegada a especies con elevado valor. Cuando el interés está en especies poco estudiadas una estrategia es utilizar microsatélites de ADN cloroplástico (cpSSRs). La naturaleza conservada de este genoma haploide, permite que los cebadores diseñados para una especie modelo puedan ser empleados interespecíficamente (Kaundun y Matsumoto, 2002). Así, los cpSSRs se convierten en una herramienta de alta resolución para examinar la variación citoplasmática en un amplio rango de especies (Provan et al., 2004). En este estudio, se ensayaron cuatro cebadores universales desarrollados en Nicotiana tabacum: Ccmp3, Ccmp5 (Weising y Gardner, 1999); Ntcp8 y Ntcp9 (Bryan et al., 1999). Se obtuvieron amplicones que se resolvieron en geles de agarosa que fueron purificados y secuenciados. El análisis de las secuencias reveló que estas regiones contienen cpSSRs a partir de las cuales se describen cuatro microsatélites específicos para el curupay: AcCcmp3: (T)8,  AcCcmp5: (T)7C(A)3T(A)10/(A)10, AcNtcp8 (T)10 y AcNtcp9 (T)6/(A)7/(A)7. Los números de ingreso de estas secuencias en la base pública de datos GenBank son: FJ560722, FJ560723, FJ560724 y FJ560725, respectivamente. La obtención de estos cpSSRs confirma que a pesar de ser el tabaco y el curupay especies distantes, los cebadores universales son herramientas efectivas en la obtención de cpSSRs a nivel interespecífico.