VIP inhibe la expresión de mediadores pro-apoptóticos inducida por TNF-alfa en células acinares de ratones NOD por una vía cAMP-dependiente

CALAFAT M; LAROCCA L; ROCA V; NESSE A; PEREZ LEIROS C

Mar del Plata

Congreso; 53 Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Los ratones NOD son un buen modelo para estudiar alteraciones histológicas y funcionales de las glándulas exócrinas por una respuesta autoinmune similar al síndrome de Sjögren. Se propone que un fallo funcional y/o una apoptosis inapropiada en glándulas salivales iniciaría la respuesta autoinmune. El VIP (péptido intestinal vasoactivo) es un neuropéptido prosecretorio y antiinflamatorio, ejerce su acción a través de dos receptores VPAC1 y VPAC2. VIP activa vías cAMP/PKA dependientes e independientes. En trabajos previos demostramos que TNF-alfa induce apoptosis con mayor expresión de bax y TP53INP1. El tratamiento con VIP inhibe la inducción de estos mediadores. Nuestro objetivo fue estudiar la acción de VIP en la apoptosis inducida por TNF en acinos aislados de glándulas submaxilares de ratones NOD, la expresión de los receptores y determinar las vías de transducción. Se emplearon hembras de 16 semanas, la apoptosis se determinó por Hoescht, Caspasa 3, expresión de bax y TP53INP1 (RT-PCR y Western Blot). El receptor 1 de TNF(rTNF1) y Receptor 1 y 2 de VIP (VPAC1 y VPAC2) por RTPCR . Se determino la activación de NFkB por microscopia confocal y la acumulación de cAMP por RIA. En condiciones basales se observó: una translocación de NFkB asociada a mayor expresión de rtnf1 (unidades arbitrarias de área-UA X±ES BALB 52±3 NOD 106±9*; *P<0.05), expresión de VPAC1 tanto en NOD como BALB. El tratamiento con VIP (10-7 ) inhibió la inducción de bax por TNF (UA: X±ES; BASAL 51±4; TNF 107±5; VIP 50±4* *P<0.05 vs TNF). En ambos acinos el pre tratamiento con VIP induce la producción de cAMP. La preincubación de acinos con H89 (inh de PKA, 1uM) revirtió el efecto de VIP en la inducción de bax por TNF (UA: X±ES; VIP 50±4; VIP+H89 116±3* *P<0.05). En acinos de ratones NOD con una activación basal de NFkB y expresión basal de rtnf1 el tratamiento con VIP inhibe la apoptosis inducida por TNFa través de la vía VPAC1/cAMP/PKA