Terapia Fotodinámica inducida por ácido 5-aminolevulínico: respuesta diferencial provocada por el transmisor gaseoso sulfuro de hidrógeno, en células de adenocarcinoma mamario murino

CALVO G, CÉSPEDES M, ORLANDO C, VALLECORSA P, CASAS A, DI VENOSA G, SÁENZ D.

Buenos Aires

Congreso; 17° Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas; 2018

Hospital de Clínicas de la Universidad de Buenos Aires

Objetivos: La terapia fotodinámica (TFD) es un tratamiento para el cáncer que combina la acción de un fotosensibilizante (Fs) con la luz. Cuando ambos se combinan intracelularmente en presencia de O2, se generan ROS, que destruyen a la célula. El ácido 5-aminolevulínico (ALA) es el precursor del Fs Protoporfirina IX (PpIX), y la ALA-TFD es una de las técnicas de TFD más utilizadas. EL sulfuro de hidrógeno (H2S) es un gas de la familia de los transmisores gaseosos, junto con el NO y el CO. Estas moléculas difunden libremente a través de las membranas biológicas y actúan sobre proteínas blanco. El H2S interviene en la vasodilatación, inflamación, ciclo celular, y actúa como citoprotector, aunque por mecanismos no del todo conocidos. El objetivo de este trabajo fue estudiar el impacto de H2S en la respuesta del ALA-TFD, en células de adenocarcinoma mamario LM2. Materiales y Métodos: Se empleó la línea celular LM2 (Inst. A.H. Roffo). La incubación de las células con NaHS, dador de H2S, no presenta toxicidad (0-10 mM). Las condiciones de la ALA-TFD fueron: 3 h exposición a ALA 1 mM e iluminación con diferentes dosis de luz. El agregado de H2S se hizo 24 hs antes de la irradiación, co-incubado con ALA, durante la irradiación, y post irradiación, y la combinación de todos ellos. Se determinó por fluorometría la cantidad de oxígeno singulete (1O2), y porfirinas. Los niveles de glutatión reducido (GSH) y la actividad de las enzimas de la síntesis de PpIX, ALA dehidrasa y porfobilinógeno deaminasa (ALA-D y PBG-D) se midieron espectrofotométricamente. Resultados: El agregado de H2S tiene impacto en la supervivencia celular a la TFD. Las dosis lumínicas letales 50 (DL50) (en mJ/cm2) fueron: Sin H2S, 114; con H2S durante la irradiación, 116; con H2S post TFD, 152; en la co-incubación del ALA y el H2S, 304; con H2S 24 hs antes de la irradiación, 355; y cuando se agrega H2S 3hs, 24hs y post TFD, no se alcanzó la DL50 aún a la máxima dosis de luz aplicada. Esto muestra que el H2S provoca una pérdida de sensibilidad de las células LM2 a la TFD. Se extrajo la PpIX intracelular luego de incubación con ALA o ALA + H2S (0-10 mM). La síntesis de PpIX se vio inhibida en un 9% a H2S 0,1 mM; 27% a 1 mM y 59 a 10 mM. Se determinó los niveles de GSH en LM2 luego de exponer las células a H2S 10 mM, 2 y 24 hs o al inhibidor BSO. Los niveles de GSH mostraron un aumento en células expuestas al H2S y una disminución al ser tratadas con BSO: control: 73; H2S: 84 y BSO: 35 nmoles/106cél. El tratamiento con BSO disminuye los niveles de GSH y vuelve a las células más sensibles a la TFD. El NaHS es capaz de disminuir directamente los niveles de 1O2 en un sistema in vitro libre de células. Se registró una disminución de la actividad de las enzimas de la ALA-D y la PBG-D en glóbulos rojos humanos luego de incubados con H2S (0-10 mM). La actividad de ALA-D disminuyó 32% con respecto a H2S 10μM y la PBG-D disminuyó un 27% con 10 mM de H2S. La actividad de ambas enzimas determinadas en tumores generados a partir de células LM2 en ratones Balb-C, también disminuyó con H2S 10 mM ex vivo: un 32% en ALA-D con 100 μM y un 64% en PBG-D. Conclusiones: Estos resultados muestran que el H2S tiene un efecto protector frente a la ALA-TFD, y dicho efecto puede deberse a una contribución multifactorial. Es importante tener en cuenta estos resultados, ya que algunos tejidos producen cantidades altas de H2S, por lo que podrían responder distinto a la ALA-TFD y, por otro lado, estos descubrimientos podrían ayudar a desarrollar estrategias que mejoren la eficacia de la ALA-TFD.