Terapia Fotodinámica: Desarrollo de nuevos derivados del ácido 5-aminolevúlico mediante la reacción multicomponente de Passerini

CALVO G, CASAS A, RAMÍREZ J, GOLA G, SÁENZ D, ORLANDO C, VALLECORSA P, MAMONE L, CERVINI G, BATLLE A, DI VENOSA G.

Jornada; III Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos. GRAFOB; 2016

 Terapia Fotodinámica:Desarrollo de nuevos derivados del ácido 5-aminolevúlico mediante la reacciónmulticomponente de Passerini.PhotodynamicTherapy: Development of new 5-aminolevulinic acid derivatives by the Passerinimulticomponent reaction.GustavoCalvo1, Adriana Casas1, Javier Ramírez2,Gabriel Gola2, Daniel Sáenz1, Cristian Orlando1,Pablo Vallecorsa1, Leandro Mamone1, Gabriela Cervini1,Alcira Batlle1, Gabriela Di Venosa11.Centro de Investigaciones sobre Porfirinas y Porfirias (CIPYP). Hospital deClínicas ?José de San Martín?, UBA-CONICET.2.UMYMFOR- Departamento de Química Orgánica, FCEyN, UBA-CONICET.gustacohcalvo@gmail.com IntroducciónLa Terapia Fotodinámica(TFD)es un tratamiento antitumoral que involucra la combinación de un agentefotosensibilizante con irradiación lumínica, lo que provoca la muerte celulardel tejido blanco1. El ácido 5-aminolevulínico (ALA) se emplea comoprecursor del fotosensibilizante endógeno Protoporfirina IX2. Laeficacia de la TFDdepende en parte de la entrada de ALA en la célula, que se ve limitada por suhidrofilicidad. Con el fin de mejorar la respuesta a la TFD, se buscadesarrollarnuevos derivados de ALA más hidrofóbicos que mejoren la captación celular. ObjetivoElobjetivo de este trabajo fue sintetizar y testear in vitro nuevos derivados de ALA con el fin de aumentar la eficaciade la TFD. Materiales yMétodosSesintetizaron 11 derivados de ALAde manera novedosa, mediante la reacciónmulticomponentede Passerini. La efectividad de la TFD se evaluó en la líneatumoral mamaria murina LM2 (Inst. Roffo), en primer lugar mediante la síntesisporfirínica intracelular, realizando una cuantificación fluorométrica  (extracción con HCl 5%) y luego mediante larespuesta a la TFD(ensayo de viabilidad celular con MTT3). Se calcularon las dosis deluz letales 50 (LD50) como los milijoules/cm2 (mJ/cm2)que producen el 50% de reducción en la viabilidad celular. Los experimentosfueron realizados tres veces por duplicado. Para determinar la significanciaestadística entre los valores se utilizó el test de Student. ResultadosLasíntesis de porfirinasaumenta con la concentración de ALA, sin embargo la cantidadde porfirinas alcanza un valor máximo debido a la regulación enzimática delciclo del hemo, el cual se ve aumentado en células tumorales. En primer lugarse testearon los derivados de ALA con el criterio de alcanzar un plateau a unaconcentración menor a la utilizada con ALA. Del primer screening sedescartaron  6 compuestos menos efectivosque ALA. El estudio continuó con los 5 restantes, el análisis de síntesisporfirínicapermitió descartar 2 de ellos. Los 3 últimos se compararondirectamente con la respuesta a la TFD, obteniendo como el más promisorio el llamado ALA-1i, conel cual a 4µM la LD50fue de 23 ± 2 mJ/cm2, mientras que ALA no indujo muerte celular enlas mismas condiciones.Es de destacar que este derivado mostró la mismarespuesta que Hexil-ALA, derivado con mejor respuesta a la TFD utilizado actualmente enpacientes oncológicos. ConclusionesDelos resultados obtenidos, podemos asegurar que los derivados de ALAsintetizados a través de la reacción multicomponente de Passerini constituyenuna opción prometedora para la TFDantitumoral, y que mediante la comparación y el diseño de derivados se podránconseguir nuevos compuestos que mejoren la eficacia de la TFD.   Referencias                        1Dougherty T., Crit Rev OncolHematol, 2,83,1984.Photodynamic therapy (PDT) of malignant tumors.                  1? Agostinis P., Berg K., CengelK.A., CA Cancer J Clin, 61, 250, 2011.Photodynamic therapy ofcancer: an update.                2Fukuda H., Casas A.,Batlle A., J Environ PatholToxicolOncol,25, 127, 2006.Use of ALA and ALAderivatives for optimizing ALA-based photodynamic therapy: a review of ourexperience.            3DenizotF., Lang R., J Immunol Methods, 89, 271, 1986. Rapid colorimetric assayfor cell growth and survival Modifications to the tetrazolium dye proceduregiving improved sensitivity and reliability.