Caracterización termodinámica de la interacción entre la NS3 helicasa del virus del dengue y ARN simple cadena: efecto de pH y temperatura

LA CABABIE; JJ INCICCO; RM. GONZÁLEZ LEBRERO; LG GEBHARD; AV GAMARNIK; SB. KAUFMAN

Workshop; Biología Celular y Molecular del ARN; 2018

Fundación Instituto Leloir

p { margin-bottom: 0.21cm; }LaproteínaNS3 del virus del Dengue (DENV) es una helicasa que catalizala hidrólisis de ATP y acopla la energía libre de esta reacción ala locomociónsobre hebras simples y eldesdplegadode cadenas dobles deARN.Eneste trabajo estudiamos el efecto de pH y temperatura sobre lainteracción entre la NS3 y ARNcsen paralelo al efecto que ejercen las sales sobre dicha interacción.Utilizando un oligonucelotido de 10 bases de ARN (F-p-R10)realizamos curvas de titulación espectroscopicas en presencia dediferentes concentraciones de iones mono y divalentes a diferentes pHy temperaturas. Mostraremosque con el incremento del pH decrece el valor de la constante deequilibrio de unión observada (Kobs),el cual es más pronunciado para la interacción de la NS3 con eloligonucleótido no marcado que con el FAM-ARN (Fluorescein amidite).Nosotros proponemos que al menos un grupo protonable en la proteínaesta directamente involucrado en la interacción con el ARNy que el estado protonado del grupo FAMdel ARN marcado favorece la estabilidad del complejo proteína ?ácido nucleico. Finalmente, de la dependencia de la Kobscon la temperatura pudimos concluir que la unión de la NS3 alF-p-R10es entalpicamente dirigida y que el efecto de la concentración desales sobre el ΔrGºobs,reside casi enteramente en el termino entrópico.