Inhibición in vitro de la expresión de SPARC (Secreted Protein, Acidic and Rich in Cysteine) en células estrelladas hepáticas. Efectos biológicos.

ATORRASAGASTI C, CAMINO A, AQUINO JB, ALANIZ L, MALVICINI M, RIZZO M, MATAR P, PODHAJCER O, SILVA M, MAZZOLINI G

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Reunión científica de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Sociedad Argentina de Fisiología

Introducción: Hemos observado previamente que la transferencia génica mediada por adenovirusde una secuencia antisentido para SPARC (AdasSPARC) fue capaz de atenuar el procesonecroinflamatorio y disminuir la fibrosis hepática en un modelo de intoxicación crónica con TAA(tioacetamida) en ratas (Camino A 2008, J. of Gene Med, 10:993-1004). La células estrelladashepáticas (CE) desempeñan un papel fundamental en el proceso fibrogénico hepático.Objetivos: Explorar in vitro en CE los mecanismos de atenuación de la fibrosis al inhibir SPARC.Materiales y Métodos: Se utilizó una línea de CE, denominada CFSC-2G. La expresión deSPARC fue evaluada por qPCR e inmunofluorescencia. Se utilizó el AdasSPARC para inhibir laproteína. Para incrementar la inhibición de SPARC se emplearon ARN de interferencia específico(siRNA). Se estudió la expresión de la citoquina TGF-β1 por ELISA. Se evaluó proliferacióncelular por el método de incorporación de timidina tritiada y la migración en cámaras transwell.Resultados: AdasSPARC redujo en un 50% la expresión de SPARC a los 5 días de la infeccióncomparado con los controles. Esto se correlacionó con disminución en la secreción de TGF-β1,principal citoquina fribrogenica, comparado con Adβgal (vector control). El siRNA redujo laexpresión del ARNm de SPARC a las 72 hs (80% de reducción vs. control). La migración de lascélulas CFSC-2G transfectadas con siRNA disminuyó significativamente (p=0,003), así como larespuesta migratoria a TGFβ1. La secreción de TGFβ1 en el sobrenadante de las célulastransfectadas con el siRNA para SPARC fue menor que las tratadas con el siRNA control.Conclusiones: La regulación negativa de la expresión de SPARC en CE resulta en unadisminución de la capacidad migratoria de las células estrelladas activadas, especialmente enrespuesta a TGF-β1, así como la producción de TGF-β1. SPARC podría ser considerada unnuevo blanco terapéutico en fibrosis hepática.