INVESTIGADORES
DE MATTEO Elena NoemÍ
congresos y reuniones científicas
Título:
Marcadores tempranos de apoptosis en biopsias hepáticas de pacientes pediátricos con infección por el virus de hepatitis C
Autor/es:
VALVA P; DE MATTEO E; SALVATIERRA K; GISMONDI MI; GALOPPO MC; PRECIADO MV
Lugar:
Vaquerías, Córdoba
Reunión:
Jornada; XXVII Reunión Científica Anual de Sociedad Argentina de Virología; 2007
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
La infección por el virus de la hepatitis C (HCV) es una de las principales causas de enfermedad hepática
crónica caracterizada por daño celular, inflamación y fibrosis cuyos mecanismos de patogenia no están totalmente
esclarecidos. Se ha postulado que la apoptosis de los hepatocitos sería inducida tanto por los linfocitos infiltrantes
como por las proteínas virales. La mayoría de los cambios morfológicos observados en células apoptóticas se deben
a la activación de caspasas, proteasas intracelulares que se activan en forma de cascada y clivan sustratos en sitios
específicos situados luego de un residuo aspartato. Entre los sustratos de estas proteasas se encuentran proteínas
del citoesqueleto, de ellas la citoqueratina 18 (CQ18) es la más importante en los hepatocitos. Durante la apoptosis,
el clivaje de CQ18 por caspasa-3 constituye un evento temprano que contribuye al colapso celular.El objetivo de este
trabajo fue determinar la presencia de marcadores tempranos de apoptosis (caspasa-3 activa y CQ18 clivada), en
biopsias hepáticas de pacientes pediátricos con infección crónica por HCV y establecer su relación con parámetros
bioquímicos, virales e histológicos.Se estudiaron 27 biopsias de 19 pacientes (7 varones, 12 mujeres). La mediana
de edad fue 9 años (1-17 años). Vías de infección: vertical (7/19), transfusiónal (8/19), hemodiálisis (1/19) y
desconocida (3/19). Ningún paciente presentó coinfección con HIV o HBV. Los niveles de alanina aminotransferasa
(ALT) al momento de la biopsia se obtuvieron a partir de las historias clínicas. En muestras de plasma se determinó
el genotipo viral por RT-PCR-RFLP. En muestras de biopsia hepática fijadas en formol en incluidas en parafina
se evaluó el grado de actividad necroinflamatoria y la fibrosis empleando el método de METAVIR, y la presencia
de esteatosis, daño de conductos biliares y folículos linfoides. Se detectaron NS3 (proteasa de HCV), caspasa-3
activa y CQ18 clivada mediante inmunohistoquímica (IHQ), y se cuantificó por recuento de las células positivas en
20 campos (1000X).Los genotipos virales se distribuyeron en: 75% 1a/c, 19% 1b y 6% 4. Los niveles de ALT fueron
elevados en el 62,5% de los casos. La actividad necroinflamatoria fue leve en el 30,7% de los casos y moderada
en el 69,2%. La fibrosis fue grado 1 en el 34,6% de los casos, grado 2 en 53,9% y grado 3 en 11,5%. No se observó
cirrosis ni hepatitis crónica severa en ninguno de los pacientes. Se halló esteatosis en el 60% de los casos, daño
de conductos biliares en el 52% y folículos linfoides en el 33% de los mismos. En aquellos pacientes con más de
una biopsia no se observó progresión del daño histológico. El genotipo viral y el grado de fibrosis no mostraron
asociación estadísticamente significativa. El número de hepatocitos infectados por HCV (NS3+) fue entre 10 y
694 (mediana 260). El número de células CQ18 clivada positivas fue entre 0 y 150 (mediana 10) y de caspasa-3
activa entre 0 y 140 (mediana 65). La correlación entre la expresión de caspasa-3 activa y NS3 mostró significado
estadístico (r=0,62; p=0,0007; Test de Pearson). Se observó una asociación estadísticamente significativa entre
la expresión de caspasa-3 activa y el grado de fibrosis (p=0,008; Test de Student), pero no entre los parámetros
histológicos y virales estudiados y la presencia de CQ18 clivada. No se observó diferencia en la presencia de CQ18
clivada, caspasa-3 activa y NS3 entre los pacientes con valores normales o aumentados de ALT. CONCLUSION:
El virus estaría implicado en la activación de apoptosis, que a su vez contribuiría con el desarrollo de fibrosis y daño
hepático general. La ausencia de correlación entre los niveles de ALT y la activación de caspasa-3 sustentaría la
participación de la apoptosis en lugar de la necrosis en la patogenia de la hepatitis por HCV.
biopsias hepáticas de pacientes pediátricos con infección crónica por HCV y establecer su relación con parámetros
bioquímicos, virales e histológicos.Se estudiaron 27 biopsias de 19 pacientes (7 varones, 12 mujeres). La mediana
de edad fue 9 años (1-17 años). Vías de infección: vertical (7/19), transfusiónal (8/19), hemodiálisis (1/19) y
desconocida (3/19). Ningún paciente presentó coinfección con HIV o HBV. Los niveles de alanina aminotransferasa
(ALT) al momento de la biopsia se obtuvieron a partir de las historias clínicas. En muestras de plasma se determinó
el genotipo viral por RT-PCR-RFLP. En muestras de biopsia hepática fijadas en formol en incluidas en parafina
se evaluó el grado de actividad necroinflamatoria y la fibrosis empleando el método de METAVIR, y la presencia
de esteatosis, daño de conductos biliares y folículos linfoides. Se detectaron NS3 (proteasa de HCV), caspasa-3
activa y CQ18 clivada mediante inmunohistoquímica (IHQ), y se cuantificó por recuento de las células positivas en
20 campos (1000X).Los genotipos virales se distribuyeron en: 75% 1a/c, 19% 1b y 6% 4. Los niveles de ALT fueron
elevados en el 62,5% de los casos. La actividad necroinflamatoria fue leve en el 30,7% de los casos y moderada
en el 69,2%. La fibrosis fue grado 1 en el 34,6% de los casos, grado 2 en 53,9% y grado 3 en 11,5%. No se observó
cirrosis ni hepatitis crónica severa en ninguno de los pacientes. Se halló esteatosis en el 60% de los casos, daño
de conductos biliares en el 52% y folículos linfoides en el 33% de los mismos. En aquellos pacientes con más de
una biopsia no se observó progresión del daño histológico. El genotipo viral y el grado de fibrosis no mostraron
asociación estadísticamente significativa. El número de hepatocitos infectados por HCV (NS3+) fue entre 10 y
694 (mediana 260). El número de células CQ18 clivada positivas fue entre 0 y 150 (mediana 10) y de caspasa-3
activa entre 0 y 140 (mediana 65). La correlación entre la expresión de caspasa-3 activa y NS3 mostró significado
estadístico (r=0,62; p=0,0007; Test de Pearson). Se observó una asociación estadísticamente significativa entre
la expresión de caspasa-3 activa y el grado de fibrosis (p=0,008; Test de Student), pero no entre los parámetros
histológicos y virales estudiados y la presencia de CQ18 clivada. No se observó diferencia en la presencia de CQ18
clivada, caspasa-3 activa y NS3 entre los pacientes con valores normales o aumentados de ALT. CONCLUSION:
El virus estaría implicado en la activación de apoptosis, que a su vez contribuiría con el desarrollo de fibrosis y daño
hepático general. La ausencia de correlación entre los niveles de ALT y la activación de caspasa-3 sustentaría la
participación de la apoptosis en lugar de la necrosis en la patogenia de la hepatitis por HCV.