POLIMORFISMO DEL PROMOTOR DEL GEN TNF-ALFA BOVINO Y SU ASOCIACION CON LA RESISTENCIA DEL HUESPED A LA DISEMINACION DEL VIRUS DE LA LEUCOSIS

LENDEZ PAMELA ANAHI; DOLCINI GUILLERMINA; JULIARENA MARCELA; GUTIERREZ SILVINA; CERIANI MARIA CAROLINA

Mar del Plata

Encuentro; V Encuentro Biologos en Red; 2010

Facultad deCiencias Exactas y Naturales-UNMdP

La leucosis es una enfermedad neoplásica causada por un retrovirus conocido como virus de la leucemia bovina (BLV). Esta enfermedad se encuentra en alta prevalencia en los rodeos de la Argentina provocando enormes pérdidas económicas en la producción ganadera y en la exportación. Se ha observado un aumento en la expresión del mensajero del TNF luego de la infección por BLV en animales capaces de eliminar el virus en la fase aguda de la infección lo que sugiere el rol importante que tendría esta citoquina en la eliminación temprana del virus. También se ha demostrado que la homocigosis G/G en la posición -824 de la región promotora del TNF-α estaría asociada con el desarrollo de linfosarcoma. Por otro lado, el alelo *902 del gen BoLA DRB3.2 del complejo mayor de histocompatibilidad de clase II está asociado con la resistencia a la diseminación viral y a la baja carga proviral.  El objetivo de este trabajo fue estudiar la relación entre el polimorfismo en la región promotora del TNF-α y la presencia del alelo de resistencia BoLA DRB3.2*902 en animales infectados con BLV. Para el estudio se utilizaron 97 bovinos de raza Holando Argentino provenientes de tambos con antecendentes de alta prevalencia de infección por BLV. La identificación de los animales infectados se realizó mediante la detección de anticuerpos anti-gp51 del BLV por ELISA (Gutierrez y col, 2001). Los animales fueron genotipificados para determinar la presencia del alelo de resistencia *902 mediante la técnica de PCR-SSO y PCR-RFLP (Juliarena y col, 2008). Con el fin de amplificar un fragmento de 687 pares de bases de la región promotora del gen del TNF-α se utilizó la técnica de PCR con una temperatura de anneling de 60°C. Para determinar los alelos, el fragmento amplificado fue digerido con las enzimas de restricción Sac I y Alu I durante 90 minutos a 37°C. Posteriormente se corrieron en gel de agarosa 1% y se visualizaron las bandas en un transiluminador de luz azul. De los 97 animales estudiados, 37 eran portadores del alelo *902 del gen BoLA DRB3.2. El 62.17% de esos animales presentaron los alelos A/A del promotor del TNF-α. El 37.83 % presentaron los alelos G/A, mientras que ningún animal portador del alelo *902 presentó el polimorfismo G/G. Por otro lado, se estudiaron 60 animales portadores de otro alelo del gen BoLA, diferente al *902; 32 de ellos portaban alelos A/A, 18 animales alelos G/A y 10 alelos G/G. Se estimó la asociación entre el polimorfismo en la región promotora del TNF-α y la presencia del alelo de resistencia BoLA DRB3.2*902 por medio del Test de Fisher y se cuantificó la misma a través del Odds Ratio (OR). Dicho análisis fue realizado con el programa Statistical Analysis Systems, Version 9.2 (2009) (SAS, Institute Inc., Cary,NC, USA). Se demostró asociación estadísticamente significativa (Test de Fisher, P=0.025), por lo cual, los datos obtenidos en este estudio sugieren que existiría una asociación entre los animales portadores del alelo de resistencia *902 y el polimorfismo en la región promotora del TNF-α, dado que aquellos animales con el alelo *902 presentaban genotipo TNF-α -824 A/A homocigotas o TNF-α -824 A/G heterocigotas, mientras que no se encontraron animales homocigotas G/G dentro de dicho grupo. Así, este polimorfismo a nivel de la región promotora del gen TNF-α en asociación con el polimorfismo del gen de CMH clase II, podría influenciar significativamente la respuesta del hospedador frente a la infección con BLV, y por consiguiente al desarrollo de alta o baja carga proviral.