Modelo animal alternativo para evaluar virulencia y efectividad del tratamiento en infecciones producidas por Rhizopus oryzae.

MACEDO, DAIANA; LEONARDELLI, FLORENCIA; DUDIUK, CATIANA; CABEZA, MATIAS; THEILL, LAURA; GAMARRA, SOLEDAD; GARCIA, GUILLERMO

Rosario

Congreso; CAM ALAM 2016 ? Congreso Argentino de Microbiología y Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2016

Introducción: El uso de insectos como modelo de experimentación alternativo ha crecido en los últimos años, ya que la inmunidad innata de los insectos es altamente homologa a la de los mamíferos. Las larvas de la polilla de la cera, Galleria mellonella, han sido ampliamente utilizadas para evaluar la virulencia de patógenos fúngicos y la eficacia de los antifúngicos. Los resultados obtenidos con este modelo alternativo tienen fuerte correlación con los datos obtenidos en estudios murinos. En éste trabajo, se utilizó G. mellonella para evaluar virulencia de Rhizopus oryzae y la efectividad del tratamiento de mucormicosis con Anfotericina B (AMB).Objetivo: Establecer y caracterizar un modelo in vivo simple y reproducible para estudiar las infecciones producidas por R. oryzae y para evaluar tratamientos antifúngicos de mucormicosis.Materiales y Métodos: Se utilizó una cepa control de R. oryzae como agente de infección y el invertebrado G. mellonella en su último estadio larval como huésped. Se determinó el inóculo óptimo de esporas que cause ≥80% mortalidad en 48 horas post infección (PI). Se infectaron larvas con concentraciones de 1x103 a 1x107 esporas/larva (lotes de 20 individuos). La infección se comprobó por cultivos de las larvas muertas. Luego se determinó el número óptimo de dosis de AMB para lograr una sobrevida similar a lo que ocurre en pacientes (≥30%) a las 96 hs PI. Se probaron dosis iguales a la CIM de la cepa utilizada (2 µg/mL equivalente a 10 mg/kg) a las 2, 26 y 50 horas PI. Las larvas se incubaron a 37ºC y se monitorearon dos veces por día. El análisis de los resultados se realizó con curvas de letalidad de Kaplan-Meier y la significancia estadística (P 0.05).Conclusión: El porcentaje de supervivencia a las 48 h (sin tratamiento) y a las 96 h (con dos dosis de AMB) obtenido en este trabajo se correlaciona estrechamente con los valores observados en pacientes hematológicos con mucormicosis (Roden MM, CID 2005). Éste estudio demuestra que las larvas de G. mellonella constituyen un modelo animal válido para evaluar la virulencia de R. oryzae y para estudiar la eficacia in vivo de la AMB. Además, éste modelo invertebrado tiene ventajas que incluyen la facilidad de manejo, el bajo costo y la posibilidad de trabajar con n muy grandes.