Tratamiento fotodinámico de células de linfoma cutáneo T utilizando derivados del ácido 5-amino levulínico.

VALLECORSA, P; CALVO G; DI VENOSA, G; SAENZ D; GOLA G; RAMIREZ J; BATLLE, A; CASAS A

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; XXXII Jornadas de Oncología, Instituto de Oncología Ángel H. Roffo, Inmunología: Avances diagnósticos y terapéuticas.; 2017

Instituto de Oncología "Angel H. Roffo"

Se evaluó la terapia fotodinámica (TFD),empleando el ácido 5 aminolevúlico (ALA) y sus derivados esterificados en laslíneas de Linfoma Cutáneo de Células T (LCCT). El objetivo deseado es deencontrar un potencial pro-fotosensibilizante para tratar esta patología, lacual gracias a sus características fisioanatómicas resulta un blanco potencialde la TFD.?LÍNEAS CELULARES Y CULTIVO CELULAR. Myla  y Hut78, ambas lineas de LCCT, se cultivan ymantienen en medio RPMI-1640, L-glutamina 2 mM, gentamicina 40 ug/ml y SFB 10%,a 37ºC en una atmósfera CO2 5%. ?ENSAYO DE VIABILIDAD DE MTT. La relación fototoxicidad fue determinadamediante el ensayo de MTT (3-(4,5- dimetil tiazol-2-yl)-2,5-difeniltetrazoliobromuro). Luego de los tratamientos, se agregó en cadapocillo, 0,5 mg/mL de MTT y se incubaron a 37º C por 1 h. Como resultado seobtuvieron cristales de formazán, se disolvieron en DMSO y se leyó laabsorbancia obtenida a 560 nm en un lector de placas (SpectraCount Packard). ?TRATAMIENTO DE TFD. Las células se incubaron en medio sin sueroconteniendo ALA o derivados y luego fueron irradiadas. A continuación, sereemplaza por medio fresco y se incubaron otras 19 h para permitir que ocurrael fotodaño, y se midió la viabilidad. Se define la dosis letal 50 (DL50) comola dosis de luz que produce el 50% de muerte celular.?TRATAMIENTO LUMÍNICO. Se usaron dos tubos fluorescentes que producen unespectro de luz entre 400 y 700 nm, con máximo en 600 nm. Las placas seubicaron a 20 cm de la fuente lumínica. Se utilizaron potencias entre 10 y150  mJ/cm2 y la densidad de poder fue de0,5 mW/cm2. ?EXTRACCIÓN DE PORFIRINAS DE LAS CÉLULAS. Las células se incubaron condiferentes concentraciones de ALA o sus derivados en medio sin suero. Paraextraer las porfirinas acumuladas en las células, se agregó 1 ml de HCl 5% y sedejó a 37º C media hora. Las porfirinas liberadas al medio, se cuantificaronpor el agregado directo de 2 ml de HCl 5%. Estas condiciones resultaron seróptimas para una extracción completa de porfirinas. Las mediciones serealizaron en un espectrofluorómetroShimadzu RF 510, utilizando el parexcitación/emisión 406/604 nm, y empleando PpIX como estándar de referencia. La cantidades de porfirinas sintetizadas (ngde PPIX/105 cél) fue de 4 a 5 para ALA, me- y He-ALA, mientras que para 88- fuede 3.25 a 4.25, y para 89-, 91-, y 95-ALA de entre 2 a 3. Para la TFD seutilizaron concentraciones bajas o plateau para las drogas más eficientes(0.25mM) por lo que las DL50 obtenidas fueron de 0.12 para He-ALA, 0.16, 0.18,0.24 y 0.23 para 88-, 89-, 91-, y 95-ALA respectivamente, mientras que ALA yme-ALA no generaron fotodaño. Se evaluó la TFD mediada por ALA y derivadosen líneas de Linfoma Cutáneo de Células T, Myla (MF) y Hut78 (S. Sésary). LaALA-TFD mostró síntesis de porfirinas y eficiencias similares a las observadasen líneas de tumores sólidos como lo es la línea LM3 de adenocarcinoma mamario.De los derivados de ALA clásicos, el Hexil ALA demostró ser altamente máseficiente que ALA y Metil ALA. También se evaluaron cuatro nuevos derivados deALA (88ALA, 89ALA, 91ALA y 95ALA), los que demostraron ser muy buenospro-fotosensibilizantes, tan buenos como el Hexil ALA. Este tipo de estudiosdemuestra el potencial de la TFD en la patología, y el screening de nuevospro-fotosensibilizantes en busca de la mejora de la terapia fotodinámica.