Parasitemia en vacas para carne infectadas naturalmente con Neospora caninum

GUAL I; HECKER Y; LEUNDA MR; PEREYRA S; CANO D; VERNA AE; GONZALEZ ALTAMIRANDA E; FERNANDEZ F; ODEON ANSELMO; MOORE DP

Congreso; 39º Congreso de la Asoc. Argentina de Producción Animal ? RAPA 2016; 2016

IntroducciónNeospora caninum es la principal causa de aborto bovino a nivel mundial (Hemphill y Gottstein, 2006); sin embargo, la infección es generalmente crónica y asintomática. El parásito permanece latente de por vida, reactivándose sólo en condiciones como la inmunosupresión o gestación. La progenie de una vaca infectada, en alrededor del 90% de los casos, nace infectada y seropositiva pero sin signos clínicos. Esta es la principal forma de mantenimiento de la enfermedad en el rodeo. El objetivo de este trabajo es detectar la parasitemia de N. caninum en vacas gestantes naturalmente infectadas mediante aislamiento in vitro, detección de ADN y serología.Materiales y métodosEl ensayo se llevó a cabo en la EEA INTA Balcarce. Se utilizaron vacas multíparas clínica y reproductivamente aptas, a las que se les realizó serología para N. caninum mediante inmunofluorescencia indirecta (IFI). Se sincronizaron mediante 2 aplicaciones de DL-cloprostenol (Ciclase DL, Syntex, Buenos Aires, Argentina) con 11 días de intervalo, para luego realizar un servicio natural durante 5 días. A los 40 días de finalizado el servicio se realizó el diagnóstico de gestación por ultrasonografía y se formaron 4 grupos: 7 vacas seropositivas a N. caninum gestantes (PG), 7 seropositivas no gestantes (PN), 4 seronegativas gestantes (NG) y 4 seronegativas no gestantes (NN). Se obtuvieron muestras de sangre con y sin EDTA, mediante punción yugular, dos veces por mes en el primer tercio de la gestación y semanalmente en los siguientes dos tercios. Se extrajeron leucocitos por centrifugación en gradiente de Ficoll (Ficoll-Paque PLUS, GE Healthcare, Uppsala, Sweden). Cinco millones de leucocitos por muestra se conservaron a -80 ºC hasta su extracción de ADN mediante kit comercial (DNeasy® Blood & Tissue Kit, QIAGEN, Austin, EE.UU.) y posterior PCR anidada para la amplificación de ADN parasitario (Buxton et al., 1998). Para intentar el aislamiento in vitro, 10.000 leucocitos por muestra se sembraron por triplicado en placas de 96 pocillos con monocapa de células VERO y medio Earles con 2% de suero fetal bovino. El medio fue reemplazado a las 24 hs de la siembra y luego 2 veces por semana durante un período no inferior a 60 días (Bień et al., 2010). Se realizó IFI para N. caninum en 17 fechas distribuidas entre el pre-servicio y el parto. Se obtuvieron muestras de sangre precalostrales de los neonatos para evaluar la transmisión congénita de la infección mediante IFI, aislamiento y PCR. Para corroborar que no hubo transferencia pasiva de anticuerpos (calostro), se midió el nivel de gamma-glutamil transferasa (GGT) en suero (Paré et al., 1996) mediante el kit comercial GGT test (Wiener Lab, Rosario, Argentina).Resultados y discusiónSe logró el aislamiento de N. caninum en una vaca del grupo PG en el día 155 de gestación. Se confirmó por PCR del aislamiento obtenido y de los leucocitos de ese mismo muestreo conservados a -80ºC. Para confirmar si la cepa detectada por aislamiento es la misma que la detectada por PCR, se realizará el genotipado de ambas. Los niveles de anticuerpos del grupo PN disminuyeron a lo largo de todo el ensayo; mientras que los del grupo PG aumentaron considerablemente en el segundo y tercer tercio de gestación. Esto es coincidente a lo observado por Stenlund et al. (1999), entre otros, y se relacionaría a una reactivación parasitaria y/o a cambios en el medio interno propios de la gestación. Todos los niveles de GGT fueron inferiores a 50 UI/ L, confirmando que ninguno de los neonatos había ingerido calostro. Los 7 neonatos fueron seropositivos a N. caninum con títulos de 1:25 a 1:12.800, lo que confirma la transmisión vertical. Las 8 vacas seronegativas permanecieron en esta condición durante todo el ensayo.ConclusionesSe pudo detectar parasitemia de N. caninum por aislamiento, PCR e indirectamente por serología. En Argentina, este aislamiento representa el primero obtenido in vitro directamente a partir de una muestra original y el primero obtenido a partir de leucocitos. La eficacia de la transmisión vertical fue del 100%. Se contribuyó a la comprensión de la dinámica de anticuerpos en vacas no gestantes. Cuando se terminen de realizar las PCR en el resto de los leucocitos se intentará caracterizar la parasitemia a lo largo de la gestación y se compararán los grupos PG y PN.Bibliografía BIEŃ, J., MOSKWA, B., & CABAJ, W. (2010). Veterinary parasitology, 173(3), 200-205. BUXTON, D., MALEY, S. W., WRIGHT, S., THOMSON, K. M., RAE, A. G., & INNES, E. A. (1998). Journal of Comparative Pathology, 118(4), 267-279. HEMPHILL, A., & GOTTSTEIN, B. (2006). Acta Parasitologica, 51(1), 15-25. PARÉ, J., THURMOND, M. C., & HIETALA, S. K. (1996). Canadian Journal of Veterinary Research, 60(2), 133. STENLUND, S., KINDAHL, H., MAGNUSSON, U., UGGLA, A., & BJÖRKMAN, C. (1999). Veterinary parasitology, 85(4), 227-234.Parasitemia en vacas para carne infectadas naturalmente con Neospora caninumGual, I.1; Hecker, Y.P.1; Leunda, M.R.2; Pereyra, S.B.2; Cano D.B.2; Verna, A.E. 1,2; González Altamiranda, E.A.1; Fernández, E.2; Odeón, A.C.2; Moore, D.P.11INTA-CONICET, EEA Balcarce, Ruta 226 Km 73,5, Balcarce, Argentina. 2INTA EEA Balcarce.*E-mail: gual.ignacio@inta.gob.arNeospora caninum parasitaemia in naturally infected beef cattle