Análisis fenotípico de células mononucleares de sangre periférica de terneras inmunizadas con Neospora caninum antes de alcanzar la pubertad

HECKER Y.P.; SORIA I.; GAMELLA M.; QUATTROCCHI V.; LANGELLOTTI C.; FIORANI F.; GUAL I.; CAMPERO L.M.; LEUNDA M.R.; VENTURINI M.C.; ZAMORANO P.; CANTÓN G.; MOORE D.P.

Jornada; X Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria (AAIV); 2017

La neosporosis bovina, causada por el protozoo intracelular Neospora caninum, provoca abortos en bovinos generando severas pérdidas económicas a nivel mundial. Las mermas productivas que provoca justifican la necesidad de avanzar en el desarrollo de inmunógenos para su control. Entre los interrogantes relacionados con la temática planteada es relevante determinar si la inmunización de vaquillonas antes de la pubertad, con una cepa de N. caninum de virulencia reducida, es capaz de generar una infección crónica que prevenga la ocurrencia de aborto y/o transmisión vertical a su progenie. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los niveles de linfocitos T CD4+ (LT CD4+), CD8+ (LT CD8+) y γδ+ (LT γδ+) en terneras inoculadas con taquizoítos vivos de la cepa local NC-Argentina LP1 antes de alcanzar la pubertad. Se utilizaron 48 terneras Aberdeen Angus seronegativas a N. caninum de entre 6 y 8 meses de edad, seronegativas también a otros patógenos reproductivos. Las terneras fueron asignadas al azar en 2 grupos: Grupo A (n = 24): animales inmunizados por vía subcutánea (SC) con una dosis de 1×106 taquizoítos vivos de la cepa local NC-Argentina LP1 en 3 ml de solución fisiológica estéril (SFE); Grupo B (n = 24): animales inoculados con placebo (SFE). Se recolectaron muestras de sangre para obtención de células mononucleares de sangre periférica (CMSP) los días 0, 11, 15 y 21 post inoculación (PI). Fueron utilizados anticuerpos monoclonales conjugados con fluorocromos FITC o PE (Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, EE.UU) para realizar las marcaciones anti-CD4 (IgG2a, CC8 clon), anti-CD8 (IgG2a, CC63 clon) y anti-WC1 para diferenciar poblaciones celulares de LT γδ (IgG2a, CC15 clon) (AbD Serotec, Raleigh, North Carolina, EE.UU). El análisis fue realizado utilizando un citómetro FACScan y software CellQuest (Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, USA). Se analizó la varianza para medidas repetidas en el tiempo usando GraphPad Prism versión 5 v.5.01 (San Diego, CA, EE.UU.) y las diferencias se consideraron significativas para valores de P 0,05). Una disminución transitoria de los niveles de LT CD4+ en vaquillonas que recibieron una formulación de taquizoítos vivos vía endovenosa pre servicio ha sido previamente reportada. La disminución en los niveles de LT γδ+ en las terneras del grupo A podría evidenciar una activación de esta población celular y migración a los tejidos linfáticos periféricos para la activación de una respuesta inmunitaria local post inmunización. Cuando estas hembras bovinas alcancen lamadurez sexual se evaluará la respuesta inmunitaria generada durante su primera gestación y se analizará si esta estrategia de inmunización es capaz de prevenir la transmisión vertical de la infección a la progenie.