INVESTIGADORES
CERUTTI Estela Soledad
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de una Metodología de Análisis de Sideróforos de Rahnella aquatilis mediante Cromatografía Líquida Asociada a Espectrometría de Masas en Tándem
Autor/es:
M. EVANGELINA; RABA, JULIO; SANZ DE FERRAMOLA, M. ISABEL; CERUTTI, SOLEDAD; CALVENTE, VIVIANA E.
Lugar:
Santa Fe
Reunión:
Congreso; 6° Congreso Argentino de Química Analítica; 2011
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Química Analítica
Resumen:
El
hierro es un micronutriente esencial involucrado en numerosos procesos
bioquímicos. A pesar de su abundancia en la naturaleza, la insolubilidad del ion
férrico dificulta su adquisición por parte de los microorganismos. Debido a esta baja disponibilidad, muchos de ellos han desarrollado mecanismos específicos para su
adquisición ya sea desde el suelo, la filósfera, ambientes acuáticos ó tejidos
de huéspedes animales. Estos mecanismos se basan en la producción de un agente quelante (sideróforo) de bajo peso molecular que se
excreta al medio. El
fenómeno también se reproduce en cultivos de laboratorio, particularmente
cuando estos medios poseen bajo contenido de hierro. Los sideróforos se
clasifican estructuralmente en dos grupos: catecolatos: producidos sólo por bacterias e hidroxamatos: generados por hongos y bacterias. La
importancia de los sideróforos se extiende más allá de su rol inmediato en la fisiología
microbiana y, actualmente, están siendo investigadas sus aplicaciones en el campo de la biotecnología.
En este sentido, es la primera vez que se reporta la obtención de sideróforos del tipo catecolatos, específicamente
enterobactina (C30H27N3O15, P.M.
669.5 g mol-1), desde la cepa bacteriana Rhanella aquatilis. La producción de enterobactina desde el microorganismo mencionado se
realizó en medios de cultivo líquidos formulados con distintas fuentes de
carbono, de nitrógeno y otras sustancias estimulantes tales como aminoácidos y
vitaminas. Para su aislamiento y purificación se siguieron procedimientos de
extracción líquido-líquido. Se evaluaron aspectos relacionados a la
preparación y limpieza de las muestras a través de filtrado e introducción
directa al sistema cromatográfico y/o previa extracción en fase sólida (SPE).
Debido a las características químicas de enterobactina, se seleccionó una
columna de cromatografía líquida de fase reversa (C18) y elución en
modo gradiente utilizando agua y acetonitrilo como fases móviles. En medio
ácido y mediado por ionización por electrospray configurada en modo positivo, los
experimentos en modo de escaneo completo demostraron la presencia del ion
pseudomolecular de enterobactina de m/z 670. Posteriormente, los fragmentos
provenientes de la disociación inducida por colisión del este ión, generaron
dos especies predominantes: m/z 224 y m/z 446, relacionadas al clivaje del
enlace éster de la estructura y al dímero de ésta última. Esta información estructural,
sumada al tiempo de retención del compuesto, permitió identificar la presencia
de enterobactina producida y reportada por primera vez desde la bacteria Rhanella
aquatilis.