INVESTIGADORES
ROGGERO SAVOINI Carlos Marcelo
congresos y reuniones científicas
Título:
La Salida De Colesterol Del Plasmalema De Espermatozoides Humanos Promueve La Asociación De Rab3A Y La Exocitosis Acrosomal
Autor/es:
BELMONTE, S.A.; LOPEZ, CECILIA; ROGGERO, CARLOS M.; DE BLAS, GERARDO A.; TOMES, CLAUDIA N.; MAYORGA, LUIS S.
Lugar:
MAR DEL PLATA
Reunión:
Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas SAIC-SAI-SAFE-SABiofisica-SAF.; 2004
Resumen:
La reaccion acrosomal (RA) implica la exocitosis del acrosoma regufada por calcio. Las gametas recien eyaculadas no pueden sufrir RA y necesitan un tiempo de capacitacibn en el tracto genital femenino o en un medio In vitro. La remocrbn de colesterol de las membranas es una rnodificacion que sufre la garneta durante la capacitacidn. sin embargo no se conoce curno esta perdida afecta el proceso de fusion de membranas durante la RA. Er este trabajo, permeabilizando espermatozoides con Estreplolisina-0, lo - gramos disociar 1os cambios que ocurren durante la capac~lacibn de aqueilos que suceden durante la exocitosis y demostramos que la sal~da de coleslerol afecta directamente el proceso de fusidn. Observamos que la ~ncubacion durante 15 min. de gametas capac~ tadasin tactas y permeabiliradas con metil-0-ciclodextrina (CD) 1 mM (extrae colesterol) aumenla signiticat~vamente el porcentaje de celulas reaccionadas. Contrariamente. CD precargada con colesterol inhibe la RA. Anfoteric~naB , un antibibtico polien~coq ue se une a esieroles, inh~bela RA en forma dosis dependiente y su efecto se revierte con colesterol, indicando que este es necesario en una concentraci6n dptima para que ocurra la RA. Usando un quelante de calcio fotoinh~b~bled,e mostramos que la salida de colesterol es un prmeso temprano en el camino exocitico. Experimentos func~onalesc ornprobaron que la perdida de colesterol no afecta la activacibn de RabSA, evento temprano de la fusion, pero promueve su anclaje a las msmbranas. El analisis de las membranas por Western Blot demuestra que la depletion de colesterol increments la cantidad de Rab3A asociada a las misrnas, resultado que se confirm6 por inmunomicroscopia electrbnica. Los resultados presentados nos permiten concluir que la salida de colesterol prornueve el reclutarniento de Rab3A a la rnernbrana plasmatica de la gameta. Esta local~zacione s fundamental para inducir el acercamiento de las rnembranas relevantes en la fusion.
