PKC REGULA LA FUNCIÓN DE LOS DOMINIOS C2A Y C2B DE SYNAPTOTAGMINA VI EN LA EXOCITOSIS ACROSOMAL.

ROGGERO, CARLOS M.; TOMES, CLAUDIA N.; DE BLAS, GERARDO A.; CASTILLO BENNETT, JIMENA; MICHAUT, MARCELA A.; FUKUDA, MITSUNORI; MAYORGA, LUIS S.

MAR DEL PLATA

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas SAIC-SAI-SAFE-SABiofisica-SAF.; 2004

El acrosoma es un granulo limitado por membranas presente en el espermatozoide. En respuesta a un estímulo sufre un tipo especial de exocitosis dependiente de calcio denominada reacción acrosomal (RA) indispensable para la fertilización. Las synaptotagminas (syt) constituyen una gran familia de proteínas transmembranas que poseen dos dominios citosólicos de unión a calcio y fosfolipidos (C2A y C2B); a estas proteínas se les atribuye la función de sensores de calcio involucrados en la exocitosis. Previamente mostramos que syt VI está presente en espermatozoides humanos. También observamos que el dominio citosólico (C2A+C2B) purificado de syt VI inhibe la RA en espermatozoides humanos permeabilizados y este efecto es regulado por fosforilación. En este trabajo estudiamos el efecto individual de C2A y C2B determinando que ambos pueden interferir con la RA. El efecto inhibitorio de estos dominios purificados fue completamente anulado por fosforilación con PKCβII. Las Thr418 y Thr419 conforman un sitio probable de fosforilación por PKC en la región polibásica del dominio C2B (KKKTTIK), una región clave para la función de las syt. Estos residuos fueron mutados a Ala (TA) para eliminar el sitio probable de fosforilación o a Glu (TE) para imitar la carga negativa introducida por fosforilación. La mutante TA fue inhibitoria y su efecto no fue regulado por fosforilación, mientras que TE no inhibió. Resultados similares se obtuvieron cuando la Thr284 en la región polibásica del dominio C2A (KCKLQTR) fue mutada a Ala o Glu. Nuestros resultados indican que existen dos sitios claves de fosforilación por PKC en syt VI que afectan fuertemente su función en la RA. Es importante destacar que estos residuos Thr están conservados en todas las syt identificadas al presente, sugiriendo que su fosforilación seria un evento clave en la regulación de la proteína.