Synaptotagmina VI es desfosforilada durante la exocitosis acrosomal

ROGGERO, CARLOS M.; CASTILLO BENNETT, JIMENA; TOMES, CLAUDIA N; DE BLAS, GERARDO A.; MAYORGA, LUIS S.

MAR DEL PLATA

Congreso; 50th Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2005

La reacción acrosomal (RA) es una exocitosis regulada, dependiente de calcio, que sufre el espermatozoide como proceso indispensable para la fecundación del ovocito. Las synaptotagminas (syt) constituyen una gran familia de proteínas transmembranas que poseen dos dominios citosólicos de unión a calcio y fosfolípidos (C2A y C2B); a estas proteínas se les atribuye la función de sensores de calcio involucrados en la exocitosis. Previamente demostramos que syt VI se encuentra presente en espermatozoides humanos, observamos que ambos dominios citosólicos C2A y C2B purificados inhiben la RA en espermatozoides humanos permeabilizados y que este efecto es anulado ante la fosforilación de los mismos. En este trabajo estudiamos la regulación por fosforilación de la Syt VI endógena. Para lo cual se creó un anticuerpo que reconoce la proteína fosforilada (antiPP), este anticuerpo en IFI mostró una clara inmunomarcación en la región acrosomal de espermatozoides no estimulados. AntiPP fue utilizado en ensayos funcionales de RA en espermatozoides permeabilizados mostrando un efecto inhibitorio similar a datos obtenidos con anticuerpo especifico antisyt VI. Esto indicaría que Syt se encuentra fosforilada en espermatozoides no estimulados. Cuando estos ensayos se realizaron en espermatozoides estimulados con calcio, se observó un descenso en la inmunomarcación en la IFI y una anulación del efecto inhibitorio de la RA en ensayos funcionales; indicando una desfosforilación de Syt. Estos resultados nos permiten concluir que Syt VI se encuentra fosforilada en espermatozoides en reposo, inhibiendo la interacción de Syt con efectores específicos, tras estimulación la proteína se desfosforilaría permitiendo que se produzca la RA. La fosforilación tendría, entonces, un papel regulatorio en la función de Syt en la exocitosis acrosomal.