HIV-1 altera la dinámica mitocondrial promoviendo la fisión y mitofagia para atenuar la apoptosis en astrocitos

OJEDA D.; URQUIZA J.; DUETTE G.; QUARLERI J.

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología. II Congreso Latienoamericano de Virología.; 2015

Sociedad Argentina de Microbiología

HIV-1 altera la dinámica mitocondrial: promueve la fisión mitocondrial y mitofagia para atenuar apoptosis en astrocitos Introducción:HIV induce elevados niveles de ROS intracelular que promueven alteración en la dinámica mitocondrial. Un ciclo vicioso de generación de ROS y daño mitocondrial genera un detrimento en la viabilidad celular que puede ser compensado por un rápido recambio de mitocondrias dañadas. El incremento en los niveles de ROS intracelular altera la dinámica mitocondrial hacia la fragmentación y consiguiente degradación por mitofagia. Objetivo:Investigar el impacto de niveles elevados de ROS intracelular sobre las mitocondrias de astrocitos infectados con HIV-1. Determinar si la pérdida del efecto citopático en astrocitos infectados con HIV-1 es generado por un mecanismo de degradación de mitocondrias dañadas.MetodologíaSe han empleado dos clones moleculares de HIV-1 (NL43-Dsred y NL43-GFP) para infectar 4 líneas celulares de astroglioma humanas U373, U87 y sus modificaciones para la expresión de los receptores CD4 y CXCR4. Análisis por citometría de flujo (FACS Canto, BD Bioscences) permitieron monitorear simultáneamente los niveles de expresión del gen reportero fluorescente de HIV-1 y evaluar los niveles de ROS (DCFDA), el gradiente del potencial de membrana mitocondrial ΔΨm (DiOC6) y los niveles de apoptosis (Caspasas 3 & 7 y Anexina V). Todas las mediciones fueron realizadas simultáneamente a los tres días post infección. La fragmentación mitocondrial y mitofagia fueron evaluadas en células transfectadas con la proteína marcadora de autofagia LC3-DsRed y luego infectadas con el clon NL43. Tres días post infección las células fueron teñidas con Mitotracker verde y analizadas por microscopía de fluorescencia (Eclipse Ti-E, Nikon).ResultadosLa producción de ROS fue significativamente mayor en células productivamente infectadas con HIV-1 comparadas con aquellas células no infectadas (30 % vs. 5%; p