ASPECTOS MORFOLOGICOS DE LA FUSIÓN DE MEMBRANAS DURANTE LA REACCION ACROSOMICA EN ESPERMATOZOIDES HUMANOS

ZANETTI, N.; ; MAYORGA L.S.

Mendoza

Jornada; VIII Jornadas de Investigación.; 2005

Facultad de Ciencias Médicas - Universidad Nacional de Cuyo

Durante la reacción acrosomal (RA) la membrana plasmática (MP) del espermatozoide se fusiona en múltiples puntos con la membrana acrosomal externa (MAE), dando lugar a la vesiculización y la liberación del contenido acrosomal. A nivel molecular, en el proceso de fusión de membranas se hallan involucradas diversas proteínas entre las que se encuentran Rab3A y las SNAREs. Nuestros principales objetivos son determinar la localización exacta de Rab3A; observar los múltiples puntos de fusión entre ambas membranas y determinar las proteínas involucradas en este proceso. Para el primer objetivo, se realizó inmunocitoquímica sobre crio-cortes de muestras de espermatozoides permeabilizados e incubados con Rab3A exógena. Los resultados obtenidos muestran que Rab3A se localiza en citoplasma y en la MP del espermatozoide antes de la RA. Para observar los puntos de fusión entre membranas se utilizaron técnicas de microscopía electrónica de transmisión (TEM) en muestras de espermatozoides tratados con 2APB (bloquea los canales de Ca2+ de la MP y luego con el ionóforo de calcio A23187 para inducir , deteniendo la misma a distintos tiempos con ácido tánico. Los resultados obtenidos nos permiten determinar la presencia de cambios morfológicos: a nivel del acrosoma observamos un aumento en el volumen y marcadas ondulaciones sobre la MAE, que contactan la MP, lo que demuestra los múltiples puntos de fusión entre ambas membranas. También observamos la presencia de vesículas en el interior del acrosoma, de las que se desconoce su origen y naturaleza. A tiempos mayores, se observó la completa vesiculización de las membranas. Los resultados obtenidos muestran la localización de Rab3A en el citosol y MP del espermatozoide. Hasta el momento no se tiene información sobre la localización de las SNAREs y Rab3a durante la fusión de membranas, pero se espera identificar estas proteínas a través de inmuno-microscopía electrónica en los puntos de contacto entre la MAE y la MP.