EL COMPLEJO NSF/alfa SNAP ESTÁ PRESENTE EN OVOCITO DE RATÓN Y PARTICIPA EN LA EXOCITOSIS DE GRÁNULOS CORTICALES

BELLO O; CARABAJAL M; ZANETTI N; MAYORGA LS; MICHAUT MA

Mar del Plata

Congreso; LIII REUNION CIENTIFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La exocitosis de gránulos corticales (GC) en el ovocito es unode los primeros signos de la activación embrionaria. Luego de la penetración del espermatozoide o la activación partenogenéticadel ovocito, los GC se fusionan con la membrana plasmática liberando su contenido al espacio perivitelino durante la reacción cortical, evento fundamental para prevenir la polispermia. El mecanismo molecular de la exocitosis de GC aún no ha sido dilucidado y sólo se conocen cuatro proteínas asociadas a este proceso: SNAP-25, Sintaxina 4, Rabfilina 3 y Rab3A. Tanto SNAP-25 como Sintaxina 4, pertenecen a la superfamilia de las SNAREs asociadas a la fusión de membranas en células endócrinas y neuronales. NSF y alfa SNAP son proteínas que forman un complejo que interaccionan con las SNAREs regulando su actividad. Nuestro objetivo fue determinar la presencia y localización de las proteínas NSF y alfa SNAP en ovocitos de ratón y analizar su rol enla exocitosis de GC por Western blot, microscopía confocal y microscopía electrónica de transmisión. Los Resultados mostraron que tanto NSF como alfa SNAP están presentes en ovocitos y se distribuyen principalmente en la región cortical de la célula sugiriendo su participación en la reacción cortical. Para evaluar la participación de NSF en la exocitosis de GC en ovocitos activados partenogenéticamente se utilizó N-etilmaleimida, reactivo alquilante capaz de inhibir la función de NSF, y se cuantificaron los GC. Por microscopía confocal y microscopía electrónica se observó que N-etilmaleimida bloquea la exocitosis de GC en ovocitos partenogenéticamente activados. Estos Resultados muestran que NSF y alfa SNAP están presentes en ovocitos de ratón y se localizan en la región cortical donde también se hallan los GC. Además NSF muestra un rol activo en la reacción cortical sugiriendola participación del complejo NSF/alfa SNAP en la exocitosis de gránulos corticales