Generación de quimeras de hIFN α2b altamente O-glicosiladas mediante fusión a una nueva etiqueta peptídica GMOPm

VERÓNICA FERRANDO; MARCOS OGGERO; RICARDO KRATJE; NATALIA CEAGLIO

Cocoyoc, Morelos

Simposio; VII Simposio Latinoamericano de Tecnología de Cultivos Celulares (SLATCC); 2016

SLATCC

En la actualidad, el uso clínico de proteínas recombinantes terapéuticas conlleva ciertas limitaciones debido a su baja estabilidad y corta vida media en circulación. En el presente trabajo, se llevó a cabo una estrategia para la producción de variantes de interferón humano (hIFN α2b) altamente O-glicosiladas, mediante la fusión a un nuevo péptido denominado GMOPm. Esta etiqueta peptídica presenta 6 sitios potenciales de O-glicosilación y deriva del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos humano (hGM-CSF). Nuestro objetivo fue conferir al hIFN α2b propiedades biológicas mejoradas, inherentes a un mayor grado de glicosilación, tales como mayor estabilidad, mayor vida media plasmática y, consecuentemente, mayor actividad biológica in vivo. Se diseñaron cinco variantes añadiendo GMOPm a los extremos N- y C-terminal de la secuencia del hIFN α2b en diferentes proporciones, para obtener moléculas entre 7 y 29 sitios potenciales de O-glicosilación. Las distintas variantes fueron expresadas a partir de líneas estables de células CHO-K1 obtenidas mediante transducción con vectores lentivirales. Las secuencias aminoacídicas de las quimeras se analizaron empleando diferentes software online para estudiar la probabilidad de O-glicosilación. Los resultados obtenidos fueron consistentes con las masas moleculares de las variantes evaluadas por SDS-PAGE seguido de western blot, indicando una incorporación exitosa de O-glicanos. De esta manera, la estrategia aplicada permitió generar nuevas quimeras GMOPm/hIFN α2b, las cuales presentaron masas moleculares mayores (entre 30-60 kDa) a las reportadas para el hIFN α2b wild type producido en CHO-K1 (22 kDa). Asimismo, las nuevas moléculas conservaron en diferente medida la actividad biológica in vitro tanto antiviral (20-100%) como antiproliferativa (2-47%) con respecto a la del hIFN α2b wild type.