La actividad antitumoral del IFN hiperglicosilado producido en células HEK potencia el empleo de este huésped sobre las CHO-K1

AGUSTINA GUGLIOTTA; NATALIA CEAGLIO; BRENDA RAUD; GUILLERMINA FORNO; LAURA MAURO; RICARDO KRATJE; MARCOS OGGERO

Cocoyoc, Morelos

Simposio; VII Simposio Latinoamericano de Tecnología de Cultivos Celulares (SLATCC); 2016

VII SLATCC

Si bien la estructura de los glicanos unidos a proteínas se encuentra conservada en eucariotas, se han encontrado diferencias entre las glicoproteínas producidas en células derivadas de hámster y de humanos. En este trabajo se llevó a cabo la producción de una variante hiperglicosilada del IFN α2b (IFN4N) en células CHO-K1 y HEK293 seguida de su purificación y una extensiva caracterización. El IFN4NCHO evidenció una más molecular aparente superior respecto del IFN4NHEK. A su vez, la variante producida en células CHO-K1 presentó una mayor proporción de isoformas ácidas y en consecuencia, un contenido de ácido siálico superior respecto de la muteína producida en células HEK. La cuantificación de monosacáridos reveló una similitud en cuanto al contenido de manosa, fucosa, N-acetilglucosamina y N acetilgalactosamina, siendo el contenido de galactosa de la variante producida en células de hámster 4 veces superior respecto de lo observado para el IFN4NHEK, lo cual sugiere la presencia de estructuras más ramificadas para el IFN4NCHO. Los resultados descriptos anteriormente fueron confirmados mediante cromatografía de intercambio aniónico débil, que evidenció un mayor contenido de glicanos bi-, tri- y tetrasialilados para la variante derivada de CHO. A su vez, los cromatogramas resultantes demostraron que para el IFN4NHEK predominan estructuras neutras y monosialiladas. El posterior análisis de los glicanos mediante HILIC-UPLC acoplado a espectrómetro de masas permitió dilucidar las estructuras más abundantes de ambas muestras. En el caso del IFN4NCHO se observaron estructuras conteniendo 2, 3 y 4 antenas, con repeticiones LacNAc, completamente sialiladas, mientras que para la muteína derivada de células HEK predominaron estructuras truncas o incompletas con la presencia de N acetilglucosamina bisectante. A pesar de las notables diferencias observadas en el grado de glicosilación de ambas moléculas, ensayos de farmacocinética revelaron la existencia de diferencias significativas sólo en los parámetros Cmáx y Tmáx, mientras que AUC, CLapp y T1/2elim no demostraron diferencias estadísticas. Ensayos de actividad biológica antitumoral in vivo confirmaron los resultados observados previamente en experimentos de actividad antiproliferativa in vitro, confirmando la mayor potencia antitumoral del IFN4NHEK. Nuestros resultados muestran la importancia de llevar a cabo una apropiada elección del huésped que será empleado en el bioproceso y potencia el uso de las céluals HEK293 para la producción de esta nueva proteína hiperglicosilada.