Etiqueta peptídica bifuncional para la producción de proteínas recombinantes

VERÓNICA FERRANDO; MARCOS OGGERO; RICARDO KRATJE; NATALIA CEAGLIO

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Simposio; 4to Simposio Argentino de procesos Biotecnológicos (SAPROBIO); 2016

SAPROBIO

El objetivo del presente trabajo fue desarrollar técnicas inmunoquímicas para la detección, cuantificación y posterior purificación de proteínas etiquetadas con un nuevo péptido bifuncional denominado GMOPm. Dicho péptido fue desarrollado en nuestro laboratorio con el fin de conferir mejoras en la estabilidad de proteínas recombinantes, a través de la adición de secuencias con elevada probabilidad de O glicosilación, y proporcionar una ventaja operativa a su proceso de producción mediante el reconocimiento de un epitope presente en GMOPm a través de un anticuerpo monoclonal (mAb CC1H7). Se evaluaron diferentes esquemas de ELISA y se realizó un diseño experimental con el fin de estudiar el efecto de sales anti-caotrópicas y del pH sobre la interacción entre el mAb CC1H7 y el péptido GMOPm, cuyos resultados se aplicarán posteriormente para la optimización de un protocolo de purificación por cromatografía de inmunoafinidad. Se desarrolló un ELISA de competición, el cual exhibió valores de sensibilidad (492 ml.ng-1) y límite de detección (20 ng.ml-1) adecuados para la cuantificación de proteínas etiquetadas con GMOPm. El diseño experimental permitió hallar condiciones óptimas de sal y pH (NaCl 4,5 M ? pH 7) que favorecen la interacción epitope-paratope, incrementando 70 veces la afinidad aparente con respecto al control sin sal a pH 7. De esta manera, el empleo del péptido bifuncional GMOPm presenta gran potencial para ser empleado en procesos de producción de proteínas recombinantes, otorgándoles propiedades biológicas mejoradas y facilitando los procesos de cuantificación y purificación.