Glicosilación no enzimática de la PBGS: in vivo e in vitro

VARELA, L; OLIVERI, L.; ROSSI, J. P.; BATLLE, A.; GEREZ, E.

Mar del Plata - Argentina

Congreso; LIII REUNION CIENTIFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIONES CLINICAS; 2008

La diabetes mellitus se caracteriza por la hiperglicemia la cual se asocia a las complicaciones de la enfermedad. La actividad de porfobilinógeno sintetasa (PBGS) disminuye en sangre de pacientes diabéticos respecto a los controles normales. La inactivación de la PBGS podría involucrar cambios en la expresión génica y/o alteraciones postraduccionales como la glicación no enzimática de la/s lisina/s cercanas al sitio activo de la enzima, o la oxidación de los residuos cisteína esenciales para la actividad. Para estudiar la causa de la disminución en la actividad de la PBGS se desarrolló un modelo murino de diabetes. Ratones machos adultos de la cepa CF1 fueron diabetizados con una única dosis de estreptozotocina (STZ) (170 mg/kg, ip) y divididos en dos grupos. El grupo STZ no recibió tratamiento adicional. El grupo STZ+I (I: insulina, 30 U/100 g, sc) recibió insulina durante 9 días antes del sacrificio. En el grupo STZ la actividad de la PBGS hepática era del 40% respecto al control (VC:12,33±1,06 U/mg; VSTZ:5,01±1,55 U/mg, p<0,05). La expresión del ARNm y los niveles de proteína de la PBGS no estaban modificados. El tratamiento con insulina (grupo STZ+I) normalizó la glucemia y restauró la actividad de la enzima a los valores normales (VC:12,33±1,06 U/mg, VSTZ+I: 10,72±1,37 U/mg). En una segunda etapa se evaluó la hipótesis de la pérdida de actividad por glicación no enzimática. Para ello, se realizaron ensayos in vitro con la enzima pura recombinante humana (PBGSh) la cual se incubó a diferentes tiempos con glucosa/BH4Na (20 mM) y manitol/BH4Na (20 mM). La reducción con BH4Na estabiliza la formación de los aductos primarios de glicación de la enzima. Se observó una disminución mayor al 50% en la actividad del PBGSh a partir de la hora de incubación en presencia de glucosa (VC:620,67±30,89 U/mg; VG: 269±26,87 U/mg, p<0,05). Estos resultados sugieren que la pérdida de actividad del PBGS observada in vivo sería debido a la glicación no enzimática.