Utilización de antioxidantes durante la aspiración folicular para optimizar el desarrollo in vitro de ovocitos porcinos

LORENZO, MS.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; Cuartas Jornadas de Jóvenes Investigadores en Ciencias Veterinarias; 2014

Facultad de Ciencias Veterinarias - UBA

Los ovarios de faena constituyen una importante fuente de ovocitos a utilizar en biotecnologías reproductivas. Al momento de la faena se interrumpe el flujo sanguíneo y los ovarios quedan bajo condiciones isquémicas. Durante el cultivo in vitro, las células son expuestas a elevadas concentraciones de oxigeno. En tejidos isquémicos la reoxigenación ocasiona la producción de radicales libres derivados del oxígeno (ROS). Un ambiente redox balanceado es importante para la calidad ovocitaria. La acumulación de ROS y la disminución de los niveles de antioxidantes, inducen apoptosis. Iwata et al., conservaron ovarios bovinos entre 3 y 7 h desde su extracción y utilizaron Dimetilurea (DMTU) y Superoxidodismutasa como antioxidantes en el líquido de aspiración resultando beneficioso en la producción de embriones. El objetivo de este trabajo fue evaluar si la suplementación del medio de aspiración con DMTU protege a los ovocitos de cerda del estrés oxidativo y de la apoptosis inducida por ROS, favoreciendo su desarrollo in vitro. Se obtuvieron complejos cumulus ovocito (COCs) por aspiración folicular a partir de ovarios de cerda de faena. En el control el medio de aspiración utilizado fue TCM 199 y el de lavado TCM 199 suplementado; en los tratamientos se agregó 2μM y 20μM de DMTU a ambos medios. Se llevo a cabo la maduración in vitro (MIV) de los COCs que poseían al menos una capa de células del cumulus. Luego de 44-48h de MIV los ovocitos denudados y fijados se tiñeron con Hoechst 33342 para evaluar el porcentaje de maduración nuclear. Aquellos que se encontraban en estadio de metafase II fueron considerados maduros. Se utilizó un n=97 (control), 123 (trat. 2μM) y 137 (trat. 20μM). Se realizó una diferencia de proporciones (Infostat v.2011) que no evidenció diferencias significativas (p˃0,05). Para determinar la conveniencia de la suplementación con DMTU, estos resultados se están complementando con la evaluación de apoptosis temprana por la técnica de Anexina y tardía por TUNEL. Asimismo, se esta poniendo a punto la fecundación in vitro y la evaluación de la maduración citoplasmática. Con los resultados obtenidos se espera poder contribuir a la optimización de la producción in vitro de embriones en la especie porcina,