Descripción Morfológica Del Proceso Apoptótico En Células De Granulosa De Ovario Bovino In Vitro

CAROU, MC.; CRUZANS, PR.; LOMBARDO, DM.

Buenos Aires

Jornada; Segundas Jornadas de Jóvenes Investigadores en Ciencias Veterinarias 2011; 2011

Subsecretaría de Ciencia y Técnica. Facultad de Ciencias Veterinarias. UBA.

A nivel morfológico y en tejidos, se ha descrito ampliamente el proceso apoptótico no así y con detalle para sistemas celulares  homólogos in vitro. En la mayoría de los sistemas in vitro hay ausencia de fagocitosis homóloga de cuerpos apoptóticos (CA) dada la elevada necrosis secundaria que deteriora la calidad de los mismos. Nuestro objetivo es establecer una descripción morfológica del proceso apoptótico en dos modelos in vitro, una línea celular establecida de células de granulosa bovina (BGC-1) y en cultivo primario de células de granulosa de ovario bovino (CPGB) ambos cultivados en presencia de SFB al 5%. Asimismo, determinar la prescencia de fagocitosis homóloga. Se analizó la apoptosis inducida por acetato de leuprolide (LA), agonista de la GnRH y por privación de SFB (apoptosis espontánea (AE)). Se utilizaron como tinciones diagnósticas y de confirmación; hematoxilina con o sin eosina, DAPI  y la reacción de TUNEL. Se observan dos tipos principales de imágenes de apoptosis, una donde la célula entera o gran parte de ella se compacta en un único y gran CA, que posteriormente es fagocitado por células vecinas o directamente liberado al medio de cultivo dejando espacios vacíos entre las células (denominado arbitrariamente como apoptosis tipo I) y la otra, donde porciones más pequeñas de la célula, algunas con y otras sin material nuclear, se compactan para formar varios CA que, a medida que se van formando, son fagocitados por células vecinas (apoptosis tipo II).  La apoptosis tipo I resultó ser más frecuente en BGC-1 que en CPGB tratados o no con LA. En situación de privación de SFB, la apoptosis espontánea (AE) es muy elevada y se observan muchos CA con gran variedad de tamaños, muchos de ellos no fagocitados. Los CPGB presenta con mayor frecuencia imágenes de apoptosis tipo II observándose una gran variedad de núcleos amorfos y disgregación celular similar a la necrosis. No es claro si se trata de una apoptosis tardía con necrosis secundaria o de una simple necrosis. No observamos figuras claras de autofagia debido a que las vacuolas autofágicas suelen ser pequeñas, pero sí observamos figuras que podrían corresponder a la autofagia de pequeñas porciones de núcleo o (nucleofagia). Las imágenes de fagocitosis homóloga, fueron confirmadas tanto con hematoxilina o DAPI como por reacción de TUNEL. Estas observaciones concuerdan con las realizadas en nuestro modelo cuando se lo analizó por citometría de flujo, ya sea por análisis de exposición de fosfatidil serinas como por el estudio del contenido nuclear por tinción con DAPI. Proponemos al proceso de fagocitosis homóloga como característico de las células de granulosa  in vitro.