Rol de las caderinas calcio dependientes en la regulación de la apoptosis y ciclo celular en una línea establecida de células de granulosa de ovario bovino (BGC-1)

REVILLA, M.; CAROU, MC.; LOMBARDO, DM.

Buenos Aires

Jornada; Jornadas de Investigadores Jóvenes en Ciencias Veterinarias.; 2011

Subsecretaría de Ciencia y Técnica. Facultad de Ciencias Veterinarias. UBA.

Las Cadherinas (CAMs) son glicoproteínas de superficie calcio dependientes,  que están involucradas en una amplia variedad de procesos tales como la adhesión celular, distribución, supervivencia, morfogénesis, formación de uniones intercelulares, mantenimiento de la integridad y tumorogénesis. Estudios hechos en porcinos para determinar los niveles de ARNm y de la expresión de CAMs (L-CAM y N-CAM) durante la ontogenia ovárica mostraron una marcada disminución de los mismos con la madurez y durante los procesos de atresia folicular. Esto le ha conferido a las CAMs un posible rol en el mantenimiento de la integridad estructural de los folículos ováricos. La adhesión celular regulada, es necesaria para la organización de las células granulosas en dos subpoblaciones necesarias en la foliculogénesis y la apoptosis de células granulosas no deseadas. El objetivo de este trabajo, fue determinar si la pérdida de uniones E-CAM, altera el comportamiento de las BGC-1 en función de la regulación de la apoptosis y de cambios en la dinámica del ciclo celular. Para ello, en experimentos previos, se utilizó EGTA 100 nM como quelante exclusivo de calcio y en presencia de SFB 5%, a fin de inducir la pérdida del contacto entre las moléculas de Cadherina, obteniéndose un aumento significativo de la apoptosis a las 24 hs de incubación. Con el objetivo de determinar si los resultados observados utilizando EGTA como disruptor de uniones E-CAM son tales, se realizó un ensayo por triplicado utilizando un anticuerpo anti E-CAM (Monclonal Anti-Uvomorulin/E-Cadherin, Clone DECMA-1, hecho en rata, U 3254, SIGMA) como disruptor específico. Se utilizó como técnica de valoración para el estudio morfológico del comportamiento celular (figuras de apoptosis), la tinción con Hematoxilina. El índice de activación de la  apoptosis respecto del control observado en presencia del anticuerpo al momento del plaqueo luego de 48 hs de incubación fue de 1,77 (8,9 % apoptosis basal). Por lo que pensamos que la disrupción de las uniones homofílicas mediados por E-CAM activa la apoptosis tanto a través  de su disrupción con EGTA como con el anticuerpo específico.