Modelo intestinal de infección por Mycobacterium Avium subsp. paratuberulosis en bovinos. Evaluación del efecto de anticuerpos específicos

JOLLY, A.; STEMPLER, ML.; FORTUNY, G.; INGRATTA, L.; GALOTTA, I. ; ALVAREZ, BB.; GUTIERREZ, MV. ; ARANDA, J.; BRINKYER, J. ; DE LA ORDEN, J.; BOVIEZ, JD.; ANGIONO, G.; LOMBARDO, DM.; MUNDO, S.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; Cuartas Jornadas de Jóvenes Investigadores en Ciencias Veterinarias; 2014

Facultad de Ciencias Veterinarias - UBA

Introducción: La paratuberculosis es una enfermedad granulomatosa intestinal que afecta al ganado, causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map). Clásicamente se considera que los anticuerpos específicos se producen en fases tardías de esta infección y que no son protectores. Sin embargo en los últimos años se ha descripto que ciertos anticuerpos pueden limitar la infección por micobacterias. La respuesta del hospedador se ha estudiado mucho en individuos crónicamente infectados, pero el conocimiento sobre los eventos tempranos de esta infección es limitado. En este sentido, el modelo de loop intestinal podría ser una herramienta de utilidad. Objetivo: Estudiar la respuesta temprana a la infección en terneros infectados en forma quirúrgica y evaluar el efecto de la presencia de anticuerpos específicos frente a Map en este modelo de infección. Materiales y Métodos: Se trabajó con 3 terneros de 1 mes de edad provenientes de un tambo libre de tuberculosis y paratuberculosis. Se realizó una infección quirúrgica por día, aplicando el protocolo anestésico aprobado por el CICUAL. Se procedió a la generación de loops en el íleon, de longitud aproximada 8 cm. Se inyectó en cada loop el inóculo correspondiente: PBS, o una dosis de 150 mg peso húmedo de Map en PBS, preincubada o no con anticuerpos específicos. Los terneros fueron mantenidos bajo anestesia durante las 4 horas post-infección. Luego, se procedió a la eutanasia y muestreo. Se tomaron muestras para análisis histopatológico, microbiológico (cultivo, PCR convencional y real time usando como blanco el inserto IS900) y para determinar la expresión de ARN mensajeros de diferentes proteínas tisulares por RT-PCR. Resultados preliminares: Se trabajó en: a) la técnica de real time PCR para IS900, estableciendo las concentraciones óptimas de primers (500 nM) y sonda (150 nM); b) el procesamiento y la inclusión en parafina de las muestras para histopatología. Se está trabajando en la tinción de los cortes con Hematoxilina/Eosina y Ziehl Nielsen y su evaluación microscópica; c) la extracción de ADN tisular utilizando Trizol y disgregación mecánica con un método casero. El rendimiento fue variable, de entre 0,8 y 5,2 µg de ADN/mg tejido (rango esperado con disgregación mecánica automática entre 2 y 4 µg de ADN/mg).