Importancia funcional de Heterochromatin Protein (HP)1γ en el proceso de miogénesis

CHARÓ N., GALIGNIANA N, SUSPERREGUY, S., TONEATTO J, PIWIEN-PILIPUK G.

Congreso; LVI Reunión científica anual. Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2011

En estudios recientes demostramos que al inducir la diferenciación de preadipocitos 3T3-L1, la proteína nuclear no histónica HP1γ se concentra transitoriamente en el polo opuesto al MTOC. Nos preguntamos entonces si la polarización nuclear de HP1γ ocurría en otros procesos de diferenciación celular, y para ello analizamos la distribución subcelular de HP1γ durante el proceso de miogénesis. Empleando inmunofluorescencia indirecta (IFI) y microscopía confocal observamos que en mioblastos C2C12, HP1γ se localiza en regiones nucleares eucromáticas y heterocromáticas. Llamativamente, luego de 4 días de inducida la diferenciación, HP1γ, una proteína sólo descripta en el núcleo hasta el presente, se localiza mayoritariamente en el citoplasma de los miotubos. HP1γ colocaliza parcialmente con fibras de actina y una fracción se detecta en la región del sarcolema. En cambio, HP1α, otro miembro de la familia de las HP1 altamente homóloga, se encuentra presente en el núcleo tanto de mioblastos como de miotubos. Análisis por Western blot de las fracciones nucleares y citoplasmáticas de miotubos C2C12 demuestra que HP1γ se encuentra en ambas fracciones. En miofibrillas aisladas así como en cortes histológicos de músculo estriado de ratón, observamos que HP1γ se localiza en las bandas Z y en el sarcolema. Para investigar la importancia funcional de HP1γ durante el proceso de miogénesis, se generaron mioblastos C2C12 en los que se interfirió la expresión de HP1γ de manera estable empleando shRNA. Las C2C12HP1γ-/- no se diferenciaron o dieron origen a miosacos, células en las que las fibras de actina no se han formado apropiadamente y los núcleos se acumulan perdiendo la distribución organizada que se observa en el miotubo normal. En síntesis, HP1γ experimenta cambios dinámicos en su distribución subcelular durante el proceso de miogénesis cumpliendo un rol esencial en la correcta formación del miotubo.