Aplicação de biomarcadores a diferentes níveis em adultos de Leptodactylus latinasus (ANURA: LEPTODACTYLIDAE) expostos ao hebicida Imazetapir

OLIVEIRA, C.; PEREZ IGLESIAS, JM; FANALI, L.Z.; FRANCO-BELUSSI, L.; BRODEUR J.C.; LARRAMENDY M.L.; NATALE G.S.

Curitiva

Congreso; XIV Congreso de Ecotoxicologia Brasileiro; 2016

Imazetapir (IMZT) es un herbicida ampliamente usado en cultivos de soja y maíz para control de malezas. Las dosis de aplicación recomendadas varían entre 0,5 a 1L/ha. No obstante, existen pocos estudios realizados evaluando efectos subletales en vertebrados acuáticos sólo habiéndose comprobado alteraciones bioquímicas en peces y, a nivel individual y genético, en larvas de anuros. El uso de biomarcadores, pone en evidencia la ocurrencia de efectos subletales, es útil para evaluar el estado de salud de poblaciones de anfibios. El objetivo del presente trabajo consistió en evaluar la respuesta de diferentes biomarcadores en adultos de Leptodactylus latinasus expuestos en condiciones de laboratorio a concentraciones del formulado recomendadas para su aplicación en campo Para evaluar la utilidad de un conjunto de parámetros fisiológicos histológicos y bioquímicos como biomarcadores, se simularon dos escenarios de exposición posibles a IMZT en su formulado Pivot H® (10,59% PI-BASF); un escenario considerando la recomendación del membrete (S1) simularía un rociado directo, y otro simulando la ocurrencia de escorrentía superficial y su llegada a un cuerpo de agua receptor, luego de una lluvia (S2), siendo considerados ambos pulsos agudos. La exposición consistió en sumergir durante 10 segundos cada individuo a la concentración de 1000 mg.L-1 IMZT en S1 y 10mg.L-1 IMZT en S2. Se evaluaron biomarcadores potenciales a diferentes niveles: individual (índices morfométricos, alteraciones en el comportamiento y presencia de anormalidades), histológicos (melanomacrófagos y patologías hepáticos como aumento del tamaño en los sinusoides, infiltración celular y vacuolización), bioquímicos (actividad enzimas hepáticas como catalasa, GSH, GST y acetilcolinesterasa) y genotóxicos (inducción de micronúcleos en eritrocitos circulantes). Cada parámetro fue evaluado a 48 y 96 h después de la exposición. Se utilizaron 10 individuos adultos de L. latinasus para cada tratamiento y cada tiempo de exposición, y se procedió de la misma manera para los respectivos controles negativos. Los datos fueron analizados por ANOVA one-way y test a posteriori de Dunnett para evaluar diferencias respecto del control. Asimismo, se realizó análisis de componentes principales con la intención de lograr un enfoque integral para todas las respuestas (end-points) evaluados, para aquellos parámetros cuya respuesta fue significativa respecto del control. Los parámetros evaluados mostraron diferencias significativas a las 48 h entre el control negativo y ambos escenarios evaluados (p < 0,05). En S1, la respuesta fue observada en biomarcadores bioquímicos (disminución de la actividad de GST) e histológicos (daño en sinusoides hepáticos). Para S2, también hubo respuesta en los biomarcadores bioquímicos (por aumento en la actividad de acetilcolinesterasa) e histológicos (daño en sinusoides hepáticos y vascularización). Por otro lado, también se detectaron diferencias significativas en las respuestas de los biomarcadores entre individuos del S1 y S2 con el control negativo a las 96 h (p < 0,05). En S1, se observó un aumento significativo en los biomarcadores bioquímicos (catalasa) y en los biomarcadores histológicos (disminución de melanina en melanomacrófagos y daño hepático en sinusoides). En tanto, en S2 se observó sólo respuesta significativa a nivel histológico con disminución de melanina ocupada por melanomacrófagos y aumento del daño hepático (disminución de melanina en melanomacrófagos hepáticos, alteración en el tamaño de los sinusoides, infiltración celular y vascularización). Los biomarcadores individuales, GSH y el ensayo de micronúcleos no mostraron respuesta a los tratamientos en los dos tiempos de exposición. El análisis exploratorio de los datos permitió detectar un gradiente de efectos adversos producidos por IMZT con progresión de efectos desde menos severos (biomarcadores bioquímicos) hacia efectos de mayor gravedad que van desde aumentos en el área melanina por melanomacrófagos hasta daño hepático en diferentes formas para ambos escenarios (biomarcadores histológicos). Este enfoque integral (multiapproach) de evaluar distintos biomarcadores simultáneamente en diferentes niveles, permite a través del empleo de análisis multivariado (PCA) lograr una interpretación integral del conjunto de respuestas, que no es posible a través de los análisis individuales. La reducción de dimensionalidades del análisis multivariado permite aislar los componentes principales y emplearlos como factores que permiten detectar diferencias significativas entre los tratamientos y el control (p < 0,01). Particularmente, la respuesta encontrada a nivel bioquímico (principalmente en catalasa y acetilcolinesterasa) coincide con los resultados obtenidos por otros autores en peces expuestos a IMZT. Consideramos importante en el futuro evaluar biomarcadores a menores tiempos de exposición e incorporar a estos estudios la respuesta de nuevos biomarcadores en otros niveles ecotoxicológicos para una comprensión integral del modo de acción de nuevos contaminantes ambientales sobre anuros autóctonos. Nuestros resultados son los primeros en evaluar de manera integral biomarcadores a distintos niveles luego de la exposición al herbicida IMZT y particularmente el primer trabajo en anuros adultos. Como sugerimos en trabajos previos, corroboramos que la utilización de biomarcadores a distintos niveles brinda información útil sobre la acción de los contaminantes en los organismos y además que la especie autóctona seleccionada es un buen modelo para evaluar una batería de biomarcadores de efecto y exposición a herbicidas.