ESTUDIO DE LAS ISOFORMAS INACTIVAS DE TRANS-SIALIDASA EN LA INFECCIÓN POR TRYPANOSOMA CRUZI

CARLA PASCUALE; BURGOS JM; CAMPETELLA O; LEGUIZAMON MS

Simposio; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2016

Sociedad Argentina de Protozoologia

Trypanoma cruzi (T. cruzi) es incapaz de sintetizar ácidosiálico, esto lo resuelve mediante la enzima trans-sialisdasa (TS) quetransfiere ácido siálico desde los glicoconjugados del huésped hacia lasmucinas de su superficie. TS es un factor de virulencia involucrado en procesosde invasión celular, apoptosis en células del sistema inmune, trombocitopenia,etc. La familia de TS contiene miembros enzimáticamente activos (TSa) einactivos (TSi), actividad determinada por una mutación puntual His/Tyr(342). T. cruzi está organizado en 6 unidades discretas de tipificación(UDT I-VI). Hemos comunicado que las cepas de alta virulencia incluidas en las UDTsII, V y VI contienen genes codificantes para ambas isoformas (TSa y TSi),mientras que las de baja virulencia (UDT I, III y IV) contienen únicamentegenes para TSa. Con el fin de analizar si TSi es un factor de virulencia o actúaen asociación con TSa, generamos parásitos transfectados con TSi.  Utilizamos la cepa K-98 (UDT I) quenaturalmente carece de esta isoforma y una construcción que contiene el gen deTSi, sus regiones regulatorias y la secuencia 3xFLAG (epitope que nos permitedistinguirla de la TS endógena). Analizamos la expresión en tripomastigotes deTSi por microscopía confocal y citometría. Ensayos in vitro en células no fagocíticas, mostraron que los parásitos queexpresan 3xFLAG/TSi muestran mayor infección en cultivos primarios decardiocitos y fibroblastos de ratas neonatas (*P<0.0238 y *P<0.0357, respectivamente) y mayor replicaciónintracelular (***P<0.001, en ambos casos) respecto a los controles (3xFLAG/TSa o vector vacío).Por otra parte, los ensayos en células fagocíticas (cultivos primarios demacrófagos murinos) no mostraron diferencias en la infección entre losdistintos grupos en el grado de replicación (**P: 0,0031) con respecto a los controles. Los resultadospreliminares in vivo infectando ratones BALB/cJ de 2 meses de edad conlos parásitos 3xFLAG/TSi (obtenidos de ratones CF1 de 15 días) mostraron un 50%de mortalidad de TSi respecto al control (75%) y también mayor inflamación. Lacomparación entre grupos se realizó mediante t de Student. Estos resultados muestran que TSi per se o en asociación con TSa, actúacomo otro factor de virulencia en la infección por T. cruzi