DISEÑO Y PRODUCCION DE UN KIT DE DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE HIDATIDOSIS EN HOSPEDEROS INTERMEDIARIOS

SERAFINO, JUAN; GALLO CALDERON, MARINA; JENSEN, OSCAR; POGGIO, THELMA VERONICA

Jornada; XXXVIII Jornadas Internacionales de Hidatidosis-XXXI Jornadas Nacionales de Hidatidos; 2016

IntroducciónLa Echinococcosis quística es una de las zoonosis de mayor prevalencia en nuestro país. El Plan Nacional de Control de la Hidatidosis, integral y multidisciplinario contempla la implementación de todas las herramientas disponibles combinando las ya tradicionales con productos de las nuevas tecnologías. Sin embargo no existe en el mercado disponibilidad de equipos de diagnóstico serológico para la detección de anticuerpos contra antígenos de Echinococcus granulosus en ovinos y caprinos que permita sostener en tiempo y forma el plan de monitoreo y vigilancia epidemiológica.El análisis del genoma de E granulosus muestra que la familia de proteínas de 8-kDa del Ag B está compuesta de un número de variantes ampliamente distribuidas y con reactividad cruzada entre las tenias. Sin embargo, algunas variantes de la proteína de 8-kDa pueden ser usadas para el diagnóstico específico de infecciones por metacestodos.ObjetivoDesarrollar y validar nueva tecnología diagnostica para la detección de anticuerpos contra antígenos de E. granulosus en hospederos intermediarios ovinos y caprinos a través de un ensayo inmunoenzimático.MetodologíaSecuencias codificantes para la proteína de 8-kDa de E. granulosus fueron amplificadas por la reacción de la polimerasa en cadena. Los productos de la reacción fueron ligados a un plásmido de expresión pGEX-1 lamba T y células de Escherichia coli BL21 DE3 fueron transformadas para la selección de clones recombinantes cuya secuencia nucleotídica fue corroborada por secuenciación. La proteína recombinante de 8-kDa fue expresada como cuerpos de inclusión, purificada por cromatografía de afinidad y caracterizada inmunológicamente. Se desarrolló un panel de sueros control de interés epidemiológico obtenidos a partir de muestreos de ovinos de zonas endémicas, libres de la enfermedad, y de animales faenados involucrados en pruebas con descarga del parásito recolectados durante los ensayos con la vacuna Providean Hidatil EG95®. Para completar la fase de estandarización del inmunodiagnòstico se procedió a la preparación y provisión de reactivos así como también al diseño de la placa, la dilución de sueros y controles, la determinación del título de corte y los criterios de aceptación y rechazo de acuerdo al Manual de OIE de técnicas de diagnostico y control de biológicos.Resultados La proteína recombinante de 8-kDa (90 aminoácidos) se expresó en el sistema procarionte según el tamaño esperado y su caracterización inmunológica se realizó con anticuerpos monoclonales anti-GST y anti-Histidina por Western Blot. Se está trabajando en la estandarización de la técnica para diferenciar animales infectados experimentalmente y naturalmente infectados, de animales no infectados utilizando paneles de sueros que cubren un amplio rango de reactividad así como también en la determinación de la reactividad cruzada con otros agentes relacionados y potencial interferencia con animales vacunados.Conclusiones A la fecha se han completado exitosamente las etapas de clonado, expresión, caracterización inmunológica y purificación de la proteína recombinante de 8-kDa y se está completando la fase de estandarización de la técnica. Los resultados de estos ensayos se utilizarán para definir el rango dinámico del kit. Cabe destacar que el método de detección serológica sensibilizando con un antígeno recombinante podría reemplazar el uso del líquido hidatídico eliminando el uso de material infectivo y la variabilidad de lotes.