PREDICCIÓN BIOINFORMÁTICA Y VALIDACIÓN DE NUEVOS EPITOPES DE T. CRUZI RECONOCIDOS POR LINFOCITOS T DE PACIENTES CON ENFERMEDAD DE CHAGAS CRÓNICA

ACEVEDO G; A ZIBLAT; M FERNANDEZ; Y HERNANDEZ; M NIELSEN; KA GOMEZ

Santa Fe

Congreso; XXVIII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias (SAP); 2016

Sociedad Argentina de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias (SAP)

La respuesta inmune celular cumple un rol central en el control de la infección por Trypanosoma cruzi. El estudio del repertorio de linfocitos T en pacientes con enfermedad de Chagas crónica es de fundamental interés para el desarrollo de vacunas profilácticas y terapéuticas. El objetivo de este trabajo fue la identificación de antígenos de T. cruzi por examinación directa de la memoria inmunológica de pacientes con enfermedad de Chagas crónica, empleando una aproximación experimental que combina métodos predictivos in silico y su validación in vitro.A partir de las secuencias de 53 proteínas de T. cruzi anotadas en la base de datos de inmunoepitopes (IEDB) se obtuvieron in silico todos los decapentámeros posibles. De entre estos, se seleccionaron aquellos de secuencia conservada entre las cepas CL Brenner y Sylvio, y se descartaron aquellos con solapamiento mayor a 9 aminoácidos con secuencias de H. sapiens. Los restantes fueron calificados mediante algoritmos predictivos de afinidad de unión con las moléculas de CMH de las familias HLA-A y ?B prevalentes en Latinoamérica (MHCPan) y las de HLA-DR más frecuentes (MHCPanII). Adicionalmente, se evaluó el grado de promiscuidad de unión a las distintas formas polimórficas de HLA (PopCover). Los 50 péptidos con mejor puntaje fueron sintetizados y aleatorizados en 5 mezclas de 10 péptidos cada una, y se utilizaron para desafiar, mediante ELISPOT para interferón-γ, células mononucleares de sangre periférica de pacientes con Chagas crónico (15 asintomáticos y 10 con cardiopatía chagásica crónica). Cuatro individuos no infectados con el parásito fueron incluidos como grupo control. Además de las mezclas de péptidos, se usaron como estímulos lisado de T. cruzi como control positivo de la respuesta específica y PHA como control positivo inespecífico. Los péptidos de las mezclas reactivas fueron evaluados en forma de péptidos individuales para determinar los potenciales epitopes inmunogénicos.Se detectaron al menos 4 péptidos capaces de inducir respuesta por secreción de interferón-γ en células de pacientes, 2 de los cuales representarían epitopes completamente novedosos. Se están realizando ensayos para caracterizar en detalle el perfil fenotípico y funcional de la(s) población(es) celulares responsables de la producción de esta citoquina.