Optimización de cultivos primarios de células de carcinoma renal de células claras como modelo in vitro para estudios metabólicos y determinantes de progresión neoplásica

RODRIGUEZ, JUAN PABLO; MELANA COLAVITA, JUAN PABLO; STOYANOFF TANIA ROMINA; CORTES MARIA ALICIA; ESPADA, J. DIEGO; TODARO, JUAN SANTIAGO; AGUIRRE, MARIA VICTORIA

Corrientes Capital

Jornada; 9º Jornadas de Investigaciónes Científicas y de Innovación Didáctica en Ciencias de la Salud; 2015

Facultad de Medicina - UNNE

RESUMEN El carcinoma renal de células claras (CRCC) es el subtipo histológico más frecuente de tumores renales. Posee intensa vascularización y lipogénesis con alta resistencia a la quimio y radioterapia convencionales. La falta de modelos ?in vitro? que permitan predecir una respuesta terapéutica más efectiva impone su desarrollo a partir de tejidos tumorales humanos para un conocimiento más profundo de la biología tumoral. El objetivo del estudio fue optimizar la implementación de cultivos primarios a partir de muestras de pacientes con CCRC para comprobar la conservación del fenotipo lipogénico contra cortes fijados del mismo origen. Se utilizaron muestras de tejido tumoral de pacientes con CRCC, sometidos a nefrectomía radical del Hosp. ?J.R. Vidal?(Ctes) n=20. Secciones de 1 mm3 se disgregaron con diversas 2 técnicas. Luego, 5x105 células/ml se cultivaron en DMEM F-12 (Sigma) con 10% suero fetal bovino, pencilina/estreptomicina (50 U/ml y 50 ug/ml), anfotericina B (2,5 ug/ml), glutamina y transferrina (5 ug/ml) en placas recubiertas que se incubaron con 5% CO2 a 37°C. Se evaluó adherencia, fenotipo lipogénico (Red Oil), potencial de clonación (N° de subcultivos), proliferación (MTT) y capacidad de migración (scratch de monocapa) bajo diferentes condiciones experimentales. El mayor rendimiento y viabilidad se verificó con digestión de colagenasa (1mg/ml; pH:7,6; 1 h a 37°C). La adherencia se logró a las 24 hs de incubación con colágeno comercial y gelatina 0,2% en 60% de los casos. Se obtuvieron monocapas en un 40% tras 5 ± 1 días de incubación con potencial de migración. El promedio de subcultivos fue de 3 ± 1. Este estudio permitió estandarizar cultivos primarios de CCRC comprobándose la conservación de la fenotipia lipogénica, logrando así una herramienta útil para el estudio de la biología tumoral y el ensayo de nuevas terapéuticas.