Expresión incrementada del gen antimitótico Meis1 en cardiomiocitos ovinos adultos. Un blanco potencial para el diseño de terapias de regeneración cardíaca.

LOCATELLI PAOLA; GIMÉNEZ CARLOS SEBASTIÁN; OLEA FERNANDA DANIELA; BAUZÁ MARIA DEL ROSARIO; HNATIUK ANNA; CROTTOGINI ALBERTO; GHIRINGHELLI DANIEL; BELAICH MARIANO

Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Cardiología; 2016

Sociedad Argentina de Cardiología

Objetivos: Meis1 es un factor de transcripción que tiene una función regulatoria del ciclo celular en el cardiomiocito adulto. En modelos murinos Meis1 mantiene el arresto del ciclo celular por medio de interacciones con proteínas inhibitorias del mismo (p15, p16, p19, p21). Se ha demostrado que la disminución de su expresión es un estimulo mitogénico para cardiomiocitos postnatales. Por lo tanto, la inhibición de Meis representaría una estrategia potencial para terapias de regeneración cardiaca.Nuestro objetivo fue evaluar la presencia y comparar la expresión de Meis1 y otros genes de ciclo celular en cardiomiocitos ovinos adultos y de fetos en etapas en las cuales los miocardiocitos son aún mitóticos (100 días de gestación).Materiales y métodos: Se diseñaron cebadores para amplificar fragmentos de los genes meis 1, cdkn1a, cdkn2aip, cdk2, cdk4, cdk6, ciclina E1, ciclina D2 y gapdh utilizando para su diseño la intersección de exones para detectar solamente RNAm. Se realizaron reacciones de RT-PCR end point a partir de RNA extraído de miocardio de ovinos adultos. Los productos de PCR fueron recuperados y clonados dentro de plásmidos genéricos. Los insertos dentro de los plásmidos, cada uno conteniendo fragmentos de los genes seleccionados, fueron confirmados a través de secuenciación (técnica de Sanger), y utilizados como calibradores de PCR en tiempo real (qPCR). A partir de RNAm obtenido de fetos de edad gestacional 100 días (n=4) se realizó RT-qPCR para obtener una medida absoluta de la expresión de los genes de interés y su posterior comparación con RNAm de cardiomiocitos adultos. La expresión se muestra como: expresión absoluta del gen objetivo/expresión absoluta de GAPDH. Análisis estadístico: Anova-Bonferroni, significación: p 100 dias de gestación (Meis1/gapdh: 0,510,03) respecto a los fetos de