COMPORTAMIENTO DE CEPAS ARGENTINAS DEL HERPESVIRUS BOVINO 4 (BoHV-4) GENETICAMENTE DIVERGENTES EN UNA INFECCIÓN EXPERIMENTAL DE TERNEROS

MORAN P; PEREZ, SE; ODEON ANSELMO; VERNA AE

Congreso; XXI Reunión Científico Técnica AAVLD; 2016

Introducción: El Herpesvirus bovino 4 (BoHV-4), miembro de la familia Herpesviridae, subfamilia Gammaherpesvirinae, género Rhadinovirus, ha sido aislado en diferentes partes del mundo en bovinos con una amplia variedad de casos clínicos, y de animales aparentemente sanos. También se lo aisló en otras especies, incluso no rumiantes, domésticas y silvestres. Si bien no se lo ha establecido como agente causal de una entidad patológica específica se lo asocia mayormente con infecciones del tracto reproductivo de los bovinos, particularmente durante el período pos parto. En nuestro país este agente viral era prácticamente desconocido hasta su detección e identificación en el año 2007, por el Servicio de Diagnóstico Veterinario del INTA Balcarce, a partir de muestras provenientes de vacas que abortaron. Hasta la fecha se han obtenido más de 50 aislamientos conjuntamente con la aparición de variantes virales que difieren filogenéticamente de las cepas prototipos americana (DN599) y europea (Movar). Estas cepas fueron caracterizadas y clasificadas en tres grupos filogenéticos diferentes, designados como genotipos 1 (europeo), 2 (americano) y 3 (nuevo grupo genotípico). En trabajos realizados in vitro, para evaluar y comparar la actividad biológica de cepas de los diferentes grupos, se observaron diferencias significativas en la dinámica de replicación entre algunas cepas. El objetivo de este trabajo fue determinar si cepas argentinas de BoHV-4, geneticamente diferentes, presentan distinto comportamiento en una infección experimental en terneros. Materiales y Métodos: Se inocularon 4 terneros, intranasalmente, con 20 ml (10 ml en cada orificio nasal), de sobrenadante libre de células, de las cepas de BoHV-4 de los diferentes grupos filogenéticos, seleccionadas en función de su actividad biológica in vitro. Las cepas virales fueron previamente amplificadas en cultivos celulares (Madin-Darby bovine kidney, MDBK) con un título de 106 TCID50/ml. Los animales se inocularon de acuerdo a la siguiente distribución: ternero 1(t1) cepa 09/508 (tipo europeo), ternero 2 (t2) cepa 08/330 (tipo americano), ternero 3 (t3) cepa 07/435 (variante correspondiente al nuevo grupo) y ternero 4 (t4) control sin infectar. Se recolectaron muestras de leucocitos de sangre periférica y de secreciones nasales y oculares, y de suero los días 0, 7, 14 y 21 pos infección (pi), y muestras de órganos para aislamiento y detección de genoma viral, luego de la eutanasia al día 21 pi. Las muestras para aislamiento se inocularon sobre monocapa de MDBK, realizándose 4 pasajes cada 72 h. Para la detección del genoma se adaptó una nested PCR para el ORF 25 (gen que codifica una de las principales proteínas de la cápside) (Fabián y Egyed 2004). La determinación de anticuerpos seroneutralizantes se realizó mediante la técnica de seroneutralización viral (SNV).Resultados: No se observaron manifestaciones clínicas en ninguno de los animales. Las cepas 08/330 y 07/435 se aislaron de los hisopados nasales a los días 7 y 14 pi, y la cepa 09/508 solamente al día 14 pi. Sólo la cepa 08/330 se aisló en hisopado ocular al día 7 pi. en el cuarto pasaje. El genoma viral fue detectado en bazo, médula, nódulo trigeminal, tráquea y cerebro del t1( cepa 09/508), en tráquea, bazo, riñón, linfonódulo retrofaríngeo y cerebro del t2 (cepa 08/330) y en linfonódulo pulmonar y cerebro del t3 (cepa 07/435). También se detectó el genoma de las cepas 08/330 (días 14 y 21 pi) y 09/508 (día 21 pi) en leucocitos. El aislamiento viral a partir de las muestras de órganos y leucocitos de los animales infectados fue negativo. Se observó seroconversión solamente en el ternero 1, aunque con bajos títulos de anticuerpos (Ac). Todos los animales, incluido el control, presentaron títulos de Ac. contra la cepa 08/330. No se detectaron Ac contra BoHV-1. No se detectó la presencia del genoma viral y no se aisló BoHV-4 en las muestras del ternero control. Discusión: Si bien el aislamiento viral en cultivos celulares es el método gold standard, en algunas circunstancias se ve dificultado por la variabilidad en la velocidad de replicación y en la presentación de efecto citopático (ECP) de las diferentes cepas virales. Dada la complejidad del aislamiento viral se requiere la utilización de técnicas de alta sensibilidad, como nested PCR, para la detección de la presencia del virus La técnica de seroneutralización viral (SNV) es uno de los aspectos controvertidos en el diagnóstico del BoHV-4. La respuesta inmune humoral no resulta eficiente en los bovinos infectados; esta situación parece estar asociada a una deficiente exposición de los epitopes involucrados en el mecanismo de neutralización viral por anticuerpos, debido a la presencia de una barrera de glicanos. Para el diagnóstico serológico, el método más utilizado es el test de ELISA. Considerando que la detección de anticuerpos con la técnica de seroneutralización puede dar un alto número de falsos negativos, o bien detectar la presencia de acción neutralizante inespecífica para algunas cepas, como se observó con la cepa 08/330, sería aconsejable utilizar otras técnicas serológicas alternativas para el diagnóstico de laboratorio como herramienta para relevamiento en los rodeos. La amplia variedad de cepas existentes en todo el mundo revela la capacidad de variabilidad que posee este virus y su complejidad tanto biológica como epidemiológica, lo cual constituye un factor de complejidad al momento del diagnóstico.