DILUCIDANDO EL MECANISMO DE TRANSPORTE DE UDP-Glc AL RETÍCULO ENDOPLÁSMICO

VANESA SOLEDAD MATTERA; LUIS BREDESTON; CRISTINA MARINO-BUSLJE; ARMANDO PARODI; CECILIA DALESSIO

Quilmes

Jornada; Jornadas de Doctorandos y Estudiantes Avanzados de CyT; 2015

Universidad Nacional de Quilmes

La enzima UDP-Glc:glicoproteína glucosiltransferasa (UGGT) es un sensor del estado conformacional de glicoproteínas del retículo endoplasmático (RE) que agrega una Glc a glicoproteínas mal plegadas. Su sustrato es UDP-Glc, que es sintetizado en citosol y cuyo mecanismo de transporte al RE no se conoce. Se asume que es análogo al de Golgi, donde hay transportadores de nucleótido-azúcares tipo antiporte (nucleótido-azúcares/nucleósidos monofosfato) y enzima nucleósido difosfatasas (NDPasas) que catalizan la transformación de los correspondientes nucleósidos difosfato a nucleósidos monofosfato. Sin embargo, no hay UDPasas en el RE de la levadura Schizosaccharomyces pombe, organismo con actividad UGGT, sugiriendo un mecanismo de transporte distinto al del Golgi. El objetivo del presente trabajo es dilucidar el mecanismo de transporte de UDP-Glc al RE en S.pombe. La hipótesis es que si el mecanismo fuera por antiporte UDP-Glc/UDP y no UDP-Glc/UMP, una actividad UDPasa localizada artificialmente en RE aboliría la actividad UGGT in vivo. Para verificar esta hipótesis, expresamos en el RE de S. pombe carentes de UDPasa endógena la UDPasa de Golgi sin su dominio transmembrana y con un péptido señal y una secuencia de retención en RE. Se verificó la correcta localización reticular de la proteína recombinante y se están realizando ensayos de actividad.