LOS FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN FUNDAMENTALES EN CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES MODULAN LA ACTIVIDAD DEL PROMOTOR DEL GEN DE LA METIL-TRANSFERASA DE ARGININAS PRMT8

CAMILA VAZQUEZ ECHEGARAY; CLAUDIA SOLARI; MARIA SOLEDAD COSENTINO; MARIA VICTORIA PETRONE; MARCOS FRANCIA; ARIEL WAISMAN; JESICA CANIZO; EMILLY VILLODRE; GUIDO LENZ; LINO BARAÑAO; SANTIAGO G. MIRIUKA; ALEJANDRA S. GUBERMAN

Mar del Plata

Congreso; LX Congreso de SAIC; 2015

SAIC

Las modificaciones post-traduccionales de los residuos de histonas llevadas a cabo por remodeladores de la cromatina son parte fundamental de la regulación epigenética celular. Un tipo de modificación es la adición de grupos metilo a los residuos arginina, mediada por la familia de enzimas metiltransferasas de argininas (PRMT), cuyo principal miembro es PRMT1, fundamental en el desarrollo. Su parálogo PRMT8 se encuentra poco estudiado y se ha reportado su expresión únicamente en neuronas adultas y neurogénesis. Sin embargo, previamente encontramos que este gen se expresa en células madre pluripotentes (CMP) y que se reprime durante la diferenciación. Bajo la hipótesis que este gen podría ser regulado por los factores de transcripción (FT) fundamentales en CMP, Oct4, Sox2 y Nanog, nos propusimos estudiar su regulación. Para ello construimos un vector reportero mediante el clonado de una región del promotor de Prmt8, abarcando un sitio putativo de unión para Nanog y uno de complejos formados por FT presentes en CMP, río arriba de la secuencia codificante para la proteína luciferasa. Utilizamos el plásmido obtenido, pPrmt8-Luc, en ensayos de trans- activación en la línea celular NIH 3T3, en la cual no detectamos expresión de los factores Oct4, Sox2 y Nanog. Mediante cotransfección con distintas cantidades de vectores de expresión para dichos FT, encontramos que la actividad luciferasa fue inducida fuertemente de manera dosis-dependiente por Nanog, y en menor medida por Oct4 y Sox2. Esto indica que estos FT modulan positivamente dicha región promotora. Para profundizar este análisis estamos estudiando la regulación de este gen en su contexto endógeno, mediante RT-qPCR, tanto silenciando los mencionados FT mediante la estrategia de short hairpin ARN en CMP, como sobreexpresando los mismos en NIH 3T3. Esperamos que estos resultados contribuyan a la comprensión de los mecanismos moleculares relevantes para el mantenimiento de las propiedades fundamentales de CMP.