EVALUACIÓN DEL ROL DE LA INTEGRINA ALFA 5 (α5) DURANTE LA REPROGRAMACIÓN

GABRIEL NEIMAN; FERNANDA MESQUITA; XIMENA GARATE; LUCÍA MORO; CARLOS LUZZANI; LEONARDO ROMORINI; GUSTAVO SEVLEVER; ALEJANDRA S. GUBERMAN; SANTIAGO G. MIRIUKA

Mar del Plata

Congreso; LX Congreso de SAIC; 2015

SAIC

Las células madre pluripotentes inducidas (CMPI) se obtienen a través de la generación de células madre a partir de células somáticas adultas. Existen cuatro factores que producen células con morfología y funcionalidad similares a células madre embrionarias a partir de la activación de genes asociados a pluripotencia y a la represión de genes de la diferenciación. Existe interés creciente en estudiar el rol de la matrix extracelular (MEx) tanto en las CMPI como en su reprogramación. La MEx es una compleja red que no solo funciona como sostén de las células, sino que presenta funciones de señalización a través de receptores de membrana llamados integrinas que interaccionan principalmente con proteínas estructurales de MEx como Fibronectina (FN). Nuestro objetivo consiste en averiguar el rol de la integrina α5 en la reprogramación de fibroblastos humanos (HFF FM) y cuya interacción se da con FN. Desarrollamos una línea celular estable inducible de fibroblastos humanos HFF FM que al tratarla con doxyciclina, disminuye la expresión de α5. Por qRT-PCR, observamos una disminución de la expresión de ésta integrina en un 75%, lo que también fue verificado por citometría. Al evaluar la proliferación de los HFF FM α5, obtuvimos una disminución de ésta en un 40%. Resultados preliminares del silenciamiento de α5 mediante edición génica a través del sistema CrispR-Cas9 muestra también una disminución de la proliferación. Por citometría evaluamos la eficiencia de reprogramación en fibroblastos humanos wt y α5 a partir de la infección viral con el plásmido STEMCCA. Mantuvimos a lo largo de tres semanas la integrina α5 silenciada y evaluamos el grado de reprogramación mediante la medición de dos marcadores de pluripotencia, SSEA-4 y TRA 1-60. Obtuvimos una caída significativa en la expresión de estos marcadores. Concluimos que silenciando la integrina α5, se afecta la proliferación de los fibroblastos y por consiguiente la potencialidad de fibroblastos para ser reprogramados.