LA EXPRESIÓN DE SOD2 ES REGULADA POR OCT4 Y NANOG, FACTORES DE TRANSCRIPCION ESENCIALES EN CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES

CLAUDIA SOLARI; MARIA VICTORIA PETRONE; CAMILA VAZQUEZ ECHEGARAY; MARIA SOLEDAD COSENTINO; ARIEL WAISMAN; MARCOS FRANCIA; EMILLY VILLODRE; GUIDO LENZ; SANTIAGO G. MIRIUKA; LINO BARAÑAO; ALEJANDRA S. GUBERMAN

Mar del Plata

Congreso; LX Congreso de SAIC; 2015

SAIC

Los factores de transcripción (FT) Oct4, Sox2 y Nanog son esenciales en el mantenimiento de las propiedades funcionales de las células madre pluripotentes (CMP), autorrenovación y pluripotencia. Las células madre embrionarias (CME) y las pluripotentes inducidas (CMPI) poseen un complejo sistema de defensa frente al estrés oxidativo, que entre otras funciones, asegura la estabilidad genómica, que es crítica para su rol en el desarrollo. Bajo la hipótesis de que estos FT regulan la expresión de genes involucrados en diversos mecanismos celulares, como los implicados en la defensa frente al estrés oxidativo, estudiamos la modulación de la expresión de algunos de estos genes en el estado indiferenciado y en la diferenciación. En este trabajo analizamos en particular la regulación del gen Sod2. Mediante RT-qPCR, previamente observamos que su expresión disminuyó a lo largo de distintos protocolos de diferenciación, tanto en líneas de CME, Ainv15 y R1, como en CMPI. Asimismo, los FT también redujeron su expresión. Luego, generamos dos vectores reporteros pSod2.1-Luc y pSod2.2-Luc, mediante el clonado de dos fragmentos que abarcan distintas regiones del promotor de Sod2, río arriba del gen de Luciferasa. Realizamos ensayos de trans-activación en una línea celular de fibroblastos, cotransfectando estas construcciones con vectores de expresión de Oct4 y Nanog, y observamos que la actividad del promotor de Sod2 es inducida por dichos FT en ambas construcciones. Finalmente, analizamos mediante RT-qPCR la modulación de la expresión de Sod2 en CME R1 que fueron transfectadas con vectores que codifican para short hairpin RNA dirigidos contra Oct4 y Nanog. Encontramos una disminución en la expresión del gen en estudio en las condiciones de reducción de mRNA de estos FT. Creemos que un mayor entendimiento de esta regulación contribuirá a la comprensión de los mecanismos moleculares relevantes en el mantenimiento de las propiedades fundamentales y la integridad de su genoma.