CARACTERIZACIÓN DE EXOSOMAS AISLADOS DE CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES Y CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES DERIVADAS DE PLURIPOTENTES

CARLOS LUZZANI; LUCÍA MORO; XIMENA GARATE; GABRIEL NEIMAN; LEONARDO ROMORINI; MARCELA GARCÍA; ANA LÍA ERRECALDE; GUSTAVO SEVLEVER; SANTIAGO G. MIRIUKA

Mar del Plata

Congreso; LX Congreso de SAIC; 2015

SAIC

Los exosomas son vesículas de entre 100-150 nm secretadas por diversos tipos celulares que constituyen una forma de comunicación entre las células. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los exosomas de Células Madre Pluripotentes (CMP) y Células Madre Mesenquimales derivadas de CMP (CMM-DP), no descriptos hasta el momento. Encontramos que tanto las CMP como las CMM-DP expresan marcadores exosomales en su membrana (CD9 y CD81) en niveles similares a las CMM de cordón umbilical (CMM-CU). No obstante, los exosomas de CMP presentan menos CD9 y CD81 que los de CMM-CU. Por otra parte, analizamos el perfil de integrinas de los exosomas de CMP y CMM-DP ya que los exosomas de CMM-CU suelen presentar estas proteinas en su membrana. Se determinó que en ambos casos el perfil de integrinas de los exosomas difiere del de las células que les dieron origen. Mediante qPCR se encontró también que los exosomas de CMP son ricos en mRNA de OCT4 y NANOG, y en micro RNAs característicos de células pluripotentes (miR205 y la familia del miR302), comparados con los de CMM. Además, analizamos los niveles de mRNA de otros genes como TGF-b, IL-6, PD-1 y PDL-1, moléculas relacionadas con la capacidad inmunomoduladora de CMM-CU y CMM-DP; y los niveles de miR145, característicos de diferenciación celular. Por último, estudiamos la cinética de entrada de los exosomas de CMP-CU marcándolos con un colorante fluorescente y comprobamos, por qPCR, que los mismos son capaces de introducir mRNA de OCT4 y NANOG en fibroblastos. En conclusión, los exosomas de CMP difieren de los de CMM-DP y de los de CMM-CU en sus marcadores de membrana, incluyendo los marcadores típicos, CD9 y CD81. Además contienen mRNA de OCT4, NANOG y TGF-b en concentraciones similares a las encontradas en el citoplasma de CMP. Finalmente, los exosomas de CMP son capaces de introducir mRNA endógenos en células diferenciadas, sugiriendo que estas vesículas son importantes moduladores parácrinos de la respuesta celular.