EL FACTOR INHIBITORIO DE LEUCEMIA EJERCE UN EFECTO ANTIAPOPTÓTICO SOBRE CÉLULAS CAR- DÍACAS DERIVADAS DE CÉLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS

CAROLINA BLUGUERMANN; GABRIEL NEIMAN; MARÍA ELIDA SCASSA; LEONARDO ROMORINI; SANTIAGO G. MIRIUKA

Congreso; LIX Congreso de SAIC; 2014

El aislamiento de las células madre embrionarias humanas (CMEh) marcó el comienzo de una era de oportunidades para la investigación y el desarrollo de terapias regenerativas. A pesar de los avances logrados en los protocolos de diferenciación de CMEh a cardiomiocitos (CM), éstos aun presentan limitaciones con respecto a la cantidad y pureza de CM obtenidos. Trabajos recientes han demostrado que la activación de la vía de transduc- ción de señales mediada por la glicoproteína gp130 promueve la supervivencia de CM en respuesta a estrés. En el presente trabajo hemos evaluado el efecto del tratamiento con el factor inhibitorio de leucemia (LIF), activador de la vía de gp130, en la viabilidad de CM derivados de CMEh. Para llevar a cabo este objetivo empleamos un protocolo de diferenciación cardíaca que incluye el uso de un medio de composición definida y el agregado en ventanas temporales acotadas de BMP-4 (10 ng/ml), Activina A (3 ng/ml), bFGF(10 ng/ml), IWR-1 (10μM) y VEGF (5 ng/ ml). Mediante el uso de una línea de CMEh (H9-cTnT), don- de la expresión de la proteina verde fluorescente y del gen que confiere resistencia a zeocina se hallan reguladas por el promotor de la cardio troponina T, pudimos observar en la poblacion resistente al antibiótico (GFP+); que el agregado de LIF (100 ng/ml) al día 8 del proceso de diferenciación permite aumentar significativamente el número de CM generados. Realizando ensayos de viabilidad celular (XTT), fragmentación del ADN (tunel y cuantificación de oligómeros por ELISA) e inmunoreactividad de las proteínas BclXL y Bax (Western blot) determinamos que LIF ejercería un efecto antiapoptótico sobre la población de CMEh expuesta a un protocolo de diferencia- ción cardiaca. Éste efecto sería efectivo sobre progenitores a partir del día 8 de diferenciación y no en precursores más tempranos. En conclusión, el LIF aumenta la supervivencia de los CM derivados de CMEh, particularmente durante las etapas finales de su diferenciación.