Efecto de antibioticos anti-micoplasma sp. en el mantenimiento del estado indiferenciado, pluripotencia, sobrevida, y crecimiento de células madre embrionarias humanas.

LEONARDO ROMORINI; DIEGO RIVA; CAROLINA BLUGUERMANN; GUILLERMO VIDELA RICHARDSON; DARÍO FERNÁNDEZ ESPINOSA; MARÍA QUESTA; GUSTAVO SEVLEVER; SANTIAGO G. MIRIUKA

Mar del Plata

Congreso; LVII Congeso de SAIC; 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clinica

Las células madre embrionarias humanas (CMEH) se definen por dos características fundamentales:auto renovación y pluripotencia. Su cultivo es complejo y costoso, por ende es indispensable extremar las condiciones de asepsia. Las CMEHs son muy susceptibles a la contaminación por Micoplasma sp., y esta infección altera sus propiedades. Antibióticos, como PlasmocinTM (Plasmo) y Ciprofloxacina (Cipro), se utilizan para proteger (profilaxis) o para erradicar la infección por Micoplasma sp. Sin embargo, aún se desconocen los posibles efectos citotóxicos de éstos sobre las CMEHs. Es por ello que el objetivo de este trabajo es estudiar el efecto de Plasmo y Cipro sobre el mantenimiento del estado indiferenciado, pluripotencia, supervivencia y proliferación de CMEHs. Las líneas HES5 (H5) y WA09 fueron tratadas con Plasmo 25 ug/ml y Cipro 10 ug/ml durante 14 días (desinfección) o durante 5 pasajes con Plasmo 5 ug/ml (profilaxis). Post-tratamiento, el mantenimiento del estado indiferenciado fue verificado por inmunofluorescencia y RT-qPCR de marcadores de indiferenciación: TRA1-60, TRA1-81, SSEA-4, Oct-4 y Nanog. Para evaluar la pluripotencia, las CMEHs se diferenciaron y se midieron por inmunofluorescencia y RT-qPCR los marcadores: Brachyury, Nkx2.5 y cTnT: mesodermo; AFP: endodermo; Nestina y Pax-6: ectodermo. En todos los casos Plasmo y Cipro no afectaron el mantenimiento del estado indiferenciado ni la pluripotencia. Más aún, generamos una línea H5-promotor de Brachyury-GFP y observamos al día 4 de la diferenciación en cuerpos embrioides (control y tratados) expresión de GFP. No vimos cambios en la viabilidad celular (ensayo XTT) de las CMEhs con ninguno de los tratamientos. Sin embargo, el tratamiento con Cipro 10 ug/ml y Plasmo 25 ug/ml enlentece el crecimiento celular (tamaño de colonias y XTT). Finalmente, podemos concluir que Plasmo y Cipro no afectan el mantenimiento del estado indiferenciado, pluripotencia o viabilidad de las CMEHs pero sí la proliferación.