Regulación de la expresión de remodeladores de la cromatina en células madre embrionarias y células madre pluripotentes inducidas

CARLOS LUZZANI; CLAUDIA SOLARI; NOELIA LOSINO; LINO BARAÑAO; SANTIAGO G. MIRIUKA; ALEJANDRA S. GUBERMAN

Mar del Plata

Congreso; SAIC; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Las Células Madre Embrionarias (CME) poseen la capacidad de proliferar indefinidamente in vitro, sin presentar cambios en su fenotipo. A su vez, pueden ser diferenciadas a múltiples tipos celulares de interés. Durante la diferenciación ocurren cambios en la organización de la cromatina a nivel global y de loci específicos. Por otra parte, en los últimos años se ha logrado reprogramar células terminalmente diferenciadas, obteniéndose células con propiedades similares a las CME. La obtención de estas células, llamadas Células Madre Pluripotentes Inducidas (CMPI), se ve favorecida al utilizar ácido valproico, un inhibidor de deacetilasas de histonas (HDACs) o cuando se sobrexpresan componentes de complejos remodeladores de la cromatina. Nuestra hipótesis es que ciertos factores de transcripción específicos de CME, como Oct3/4, SOX2 y Nanog, podrían estar regulando la expresión de genes que codifican para ciertas enzimas modificadoras de la cromatina y que éstas, a su vez, podrían modular la expresión de los primeros. El objetivo de este trabajo es estudiar la participación de factores remodeladores de la comatina en el mantenimiento del estado indiferenciado, durante la diferenciación y en la generación de CMPI. Mediante RT-qPCR estudiamos la expresión génica de algunas acetilasas de histonas, HDACs, metiltransferasas y demetilasas de histonas en CME en estado indiferenciado y durante su diferenciación y en CMPI. Encontramos que el perfil de expresión de los factores analizados en CMPI es similar al de CME y que éstos varían con la diferenciación, sugiriendo que la regulación de la expresión de estos factores es crítica. Por último, diseñamos un sistema lentiviral de silenciamiento génico de algunos de dichos remodeladores y probamos su efectividad en un sistema heterólogo. Este sistema servirá para estudiar la relevancia de dichos remodeladores en el mantenimiento del estado indiferenciado y en los procesos de diferenciación y desdiferenciación celular.