Sexado y genotipado de microsatélites usando ADN extraído de plumas colectadas en el suelo de colonias reproductivas de Platalea ajaja (Aves: Coconiiformes).

CAROLINA ISABEL MIÑO; SÍLVIA NASSIF DEL LAMA

Sao Carlos

Simposio; II Simposio de Genética de Aves; 2005

Universidade Federal de Sao Carlos - UFSCar

A amostragem não-invasiva vem sendo muito utilizada na genética de populações, especialmente no estudo de espécies ameaçadas ou quando a coleta de material biológico é trabalhosa. A coleta de penas da muda pré-ciclo reprodutivo, no solo das colônias de Platalea ajaja,, pode ser uma boa alternativa para amostrar populações da espécie pois o acesso aos ninhos dessa espécie apresenta dificuldades. O objetivo deste trabalho foi padronizar um método de extração, sexagem e genotipagem do DNA obtido a partir das penas coletadas no solo de indivíduos adultos de P.ajaja. O DNA foi extraído pelo método convencional fenol-clorofórmio, a partir de uma porção da parede folicular da pena que inclui o umbílico superior e onde se encontra um pequeno coágulo de sangue. O protocolo básico foi modificado procedendo-se à incubação de 150 mg de tecido por sete dias, com agitação e adições diárias de 0,3 mg de Proteinase K. Esse procedimento possibilitou a completa dissolução do tecidos da parede folicular da pena. Foram obtidas amostras de DNA com concentração total de 1200-2400 ng/amostra. A qualidade do DNA foi avaliada em gel de agarose 1% , pela amplificação de locos de microssatélites isolados na espécie Mycteria americana (WS03 e WS09) e pela sexagem molecular baseada no loco do CHD. As amplificações nos locos testados apresentaram bom rendimento. Para se evitar que as penas provenientes do mesmo indivíduo sejam analisadas mais de uma vez nos estudos populacionais propõe-se a exclusão de indivíduos com genótipos idênticos em todos os locos. O método padronizado neste trabalho demonstra que as penas coletadas no solo fornecem DNA de boa qualidade e em quantidade suficiente para a identificação dos genótipos em diversos locos de marcadores moleculares. Esta nova estratégia de amostragem dos indivíduos adultos nas colônias reprodutivas poderá ser utilizada nas análises de genética de populações nessa espécie.